il12在牙齦卟啉單胞菌脂多糖促泡沫細(xì)胞形成過程中的作用

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1、IL12在牙齦卟啉單胞菌脂多糖促泡沫細(xì)胞形成過程中的作用：閆福華吳春芳李厚軒雷浪駱凱孔寧?kù)o【摘要】目的觀察白細(xì)胞介素12(IL12)預(yù)刺激在牙齦卟啉單胞菌脂多糖(P.gingivalisLPS)促泡沫細(xì)胞形成過程中對(duì)細(xì)胞因子的影響。方法用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)將人THP1單核細(xì)胞的巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)48h形成泡沫細(xì)胞。在巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞培養(yǎng)液中分別加入IL12作用2h后，巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中加入oxLDL和P.gingivalisLPS，泡沫細(xì)胞培養(yǎng)液中加入P.gingivalisLPS。使用ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液上清中IL1β和腫

2、瘤壞死因子α(TNFα)的水平，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IL1β、IL10、IL12和IL18mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果在泡沫細(xì)胞形成過程中，IL12預(yù)刺激可以降低培養(yǎng)液上清內(nèi)TNFα水平，降低細(xì)胞內(nèi)IL10和IL12mRNA轉(zhuǎn)錄水平;泡沫細(xì)胞受P.gingivalisLPS刺激過程中，IL12預(yù)刺激可以增加培養(yǎng)液上清IL1β水平，減少細(xì)胞內(nèi)IL18mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，增加IL10mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)論IL12預(yù)刺激影響P.gingivalisLPS促泡沫細(xì)胞形成過程中炎癥細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和分泌。【關(guān)鍵詞】脂多糖類;

3、卟啉單胞菌，牙齦;白細(xì)胞介素12;巨噬細(xì)胞;低密度脂蛋白類白細(xì)胞介素12(interleukin12,IL12)主要是由單核/巨噬細(xì)胞分泌表達(dá)的一種細(xì)胞因子，其相對(duì)分子量為75KD，是由不同基因編碼的2個(gè)亞基p35和p40通過二硫鍵結(jié)合在一起的異二聚體。IL12具有廣泛的生物學(xué)活性，它能促進(jìn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞的增殖、活化及細(xì)胞毒作用;促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化，并誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生;調(diào)節(jié)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化增殖，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫功能[1]。有研究表明，通過注射IL12于LDLr/小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)其產(chǎn)生IL12抗體，可以減少小鼠體內(nèi)動(dòng)脈

4、粥樣硬化病損形成[2]。脂多糖(lipopolysacchride,LPS)是牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)細(xì)胞壁的重要成分，能激活宿主的先天免疫系統(tǒng)，與牙周炎的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。LPS在進(jìn)入血液后，在脂質(zhì)聚集部位可以同細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)TLR2和TLR4以及與糖基化磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinosito，GPI)結(jié)合的CD14相結(jié)合，從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)[3]。P.gingivalis的活菌、外膜泡及其LPS在氧化低密度脂蛋白(oxidizedloa公司)

5、;oxLDL(協(xié)和醫(yī)科大學(xué)生化教研室脂蛋白組，北京協(xié)和三友科技有限公司);腫瘤壞死因子α(TNFα)和IL1βELISA檢測(cè)試劑盒(北京晶美生物公司);熒光定量PCR儀(PRISM7700，美國(guó)AppliedBiosystems公司);P.gingivalisLPS(美國(guó)Invivogen公司);IL12(美國(guó)PeproTech公司)?！　?.2方法　　1.2.1THP1單核細(xì)胞的分化人THP1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，以含100mL/L胎牛血清的RMPI1640培養(yǎng)基于37℃、50mL/L的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)擴(kuò)增。此后按不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康慕臃N在

6、6孔板內(nèi)，以160nmo1/L的PMA誘導(dǎo)36h使其分化為巨噬細(xì)胞，然后使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h，以去除PMA對(duì)巨噬細(xì)胞的影響并且同步化細(xì)胞，再用于實(shí)驗(yàn)。　　1.2.2實(shí)驗(yàn)分組為研究IL12在P.gingivalisLPS促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬oxLDL形成泡沫細(xì)胞過程中的影響，巨噬細(xì)胞按下面分組加入培養(yǎng)液：(1)空白對(duì)照組：以RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng);(2)oxLDL+LPS組：以RPMI1640+50μg/mLoxLDL+1μg/mLP.gingivalisLPS共同培養(yǎng);(3)IL122h+oxLDL+LPS組：在RPMI1640培養(yǎng)基

7、中加入10ng/mLIL12作用2h后，再加入50μg/mLoxLDL+1μg/mLP.gingivalisLPS共同培養(yǎng)?！　檠芯縄L12在P.gingivalisLPS對(duì)泡沫細(xì)胞的影響，巨噬細(xì)胞先以50μg/mLoxLDL誘導(dǎo)48h形成泡沫細(xì)胞，然后按下面培養(yǎng)條件進(jìn)一步培養(yǎng)：(1)oxLDL48h+LPS組：泡沫細(xì)胞培養(yǎng)基中加入1μg/mLP.gingivalisLPS;(2)oxLDL48h+IL122h+LPS組：泡沫細(xì)胞中加入IL12作用2h后，再加入1μg/mLP.gingivalisLPS?！　?.2.3TNFα和IL

8、1β水平的ELISA法檢測(cè)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中加入各刺激物后48h，吸出條件培養(yǎng)液，定容，以1000r/min離心5min除去懸浮細(xì)胞，分裝后置于-80