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1、厄貝沙坦對(duì)離體大鼠心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的影響【摘要】目的觀察厄貝沙坦對(duì)離體大鼠心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的影響，并初探其機(jī)制。方法應(yīng)用Langendorff裝置采用完全停灌復(fù)灌的方法制作離體大鼠心肌缺血再灌注損傷模型。將48只SD大鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（K-H緩沖液持續(xù)灌流110min）、缺血再灌注組（K-H緩沖液持續(xù)灌注至各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定后，約20min，停灌30min，再灌60min）、厄貝沙坦組（灌注方法同缺血再灌注組，但將K-H緩沖液內(nèi)加厄貝沙坦10-6mol/L）。(1)取每組8只觀察心肌
2、組織氧化物歧化酶活性，丙二醛含量變化。（2）每組其余8只：①對(duì)照組K-H緩沖液持續(xù)灌流170min。②缺血再灌注組和厄貝沙坦組持續(xù)灌注至各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定后停灌30min，再灌注120min。觀察對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果（1）缺血再灌注組大鼠心肌組織中丙二醛含量較對(duì)照組明顯升高（P＜0.01），總超氧化物歧化酶活性較對(duì)照組明顯降低（P＜0.01）。（2）厄貝沙坦組與缺血再灌注組比較，總超氧化物歧化酶活性明顯升高（P＜0.01），丙二醛含量明顯降低（P＜0.01）。（3）缺血再灌注組細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于對(duì)
3、照組（P＜0.01）。（4）厄貝沙坦組細(xì)胞凋亡指數(shù)與缺血再灌注組比較顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論厄貝沙坦有抑制心肌缺血再灌注損傷中心肌細(xì)胞凋亡的作用。其機(jī)制可能與厄貝沙坦清除氧自由基，減少脂質(zhì)過氧化有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】再灌注損傷細(xì)胞凋亡近來研究表明，細(xì)胞凋亡是心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)之一，且發(fā)現(xiàn)心肌損傷加重與心肌細(xì)胞凋亡增加同時(shí)并存。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)試驗(yàn)表明血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）可以抑制缺血再灌注損傷發(fā)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[1]，而厄貝沙坦是一種新合成的血管緊張素受體拮抗劑（ARBs
4、），厄貝沙坦是否具有同樣的抗缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，相關(guān)研究較少。本試驗(yàn)應(yīng)用Langendorff離體工作心臟模型，排除神經(jīng)體液和外周血管阻力對(duì)藥物作用的影響，研究厄貝沙坦對(duì)離體大鼠心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的影響，并探討其可能機(jī)制。1材料和方法1.1材料選用SD大鼠48只，體質(zhì)量250～300g（遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）；厄貝沙坦：杭州圣諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司；總超氧化物歧化酶、丙二醛試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；Annexin-V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒由北京賽寶生物
5、技術(shù)有限公司提供。1.2方法1.2.1離體心灌流模型建立術(shù)前1h大鼠腹腔注射肝素(1000U/kg),3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后迅速開胸取心,主動(dòng)脈插管懸掛于Langendorff灌流裝置上,灌流后復(fù)搏。灌流液為95%O2+5%CO2飽和的KrebsHanselet(KH)磷酸緩沖液,灌流壓70cmH2O,溫度穩(wěn)定在37℃。電極置心臟左上及右下角,連Medlab生物信號(hào)處理系統(tǒng)記錄心電圖。左心室插管經(jīng)換能器記錄血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)。主動(dòng)脈插管夾閉30min停止灌流,然后放開60min恢復(fù)灌流建立IR
6、模型。1.2.2試驗(yàn)分組隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、缺血再灌注組、厄貝沙坦組，每組16只。（1）每組各取8只：①對(duì)照組：大鼠心臟離體后在灌流裝置上以KH液持續(xù)灌流110min。②缺血再灌注組：離體心臟在灌流裝置上以KH液穩(wěn)定灌流20min,主動(dòng)脈插管夾閉30min后放開60min。③厄貝沙坦組：灌注方法同缺血再灌注組，但將K-H緩沖液內(nèi)加厄貝沙坦10-6mol/L。（2）每組其余8只：①對(duì)照組K-H緩沖液持續(xù)灌流170min。②缺血再灌注組和厄貝沙坦組持續(xù)灌注至各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定后停灌30min，再灌注12
7、0min。1.2.3總超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量測(cè)定再灌結(jié)束后立即取下心臟，剪掉心房、右室及心臟表面脂肪組織，濾紙吸干，取左室游離壁同一部位心肌，置-70℃冰箱保存，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后制成10%心肌勻漿，按試劑盒說明用黃嘌呤氧化法測(cè)定總超氧化物歧化酶活性，用TAB比色法測(cè)定丙二醛含量。1.2.4心肌細(xì)胞凋亡率測(cè)定再灌注結(jié)束后取左室游離壁同一部位心肌組織，用Annexin-V-FITC/PI流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。將心肌組織制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度為1×109個(gè)/L。取1mL細(xì)胞，1000r/min，4
8、℃離心10min，棄上清。加入1mL冷的PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮。重復(fù)上述步驟2次。將細(xì)胞重懸浮于200μLBindingBuffer。加入10μLAV和5μLPI，輕輕混勻，室溫避光反應(yīng)15min。加入300μLBindingBuffer，在1h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件完成統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量結(jié)果采用x±s形式表示，組間計(jì)量資料差異比較采用單因素及LSD法進(jìn)行比較。2.2厄貝沙坦對(duì)大鼠缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響缺血再灌注組細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于對(duì)照組（P＜0.0
