苦蘵多糖的提取及體外抗氧化活性的研究

《苦蘵多糖的提取及體外抗氧化活性的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、苦蘵多糖的提取及體外抗氧化活性的研究【摘要】目的研究苦蘵多糖的醇沉條件及其體外抗氧化活性。方法經(jīng)超聲提取，除脂，除蛋白等工藝得到苦蘵粗多糖，并考察了醇沉條件(醇沉比、溫度、pH、時(shí)間、濃縮比)對(duì)多糖沉淀的影響。采用體外實(shí)驗(yàn)研究了苦蘵多糖對(duì)·OH和DPPH的清除作用及對(duì)大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化的抑制作用。結(jié)果在最佳的醇沉條件(濃縮比4∶1,溫度-20℃，醇沉?xí)r間16h，醇沉比為1∶4，pH為7)下，多糖提取率為3.15%。多糖對(duì)大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化的抑制率可達(dá)80%,對(duì)·OH和DPPH也都有很好的清除作用。結(jié)論苦蘵果實(shí)中多糖有良好的體

2、外抗氧化活性?！娟P(guān)鍵詞】苦蘵多糖抗氧化　　Abstract:ObjectiveTostudytheantioxidantactivitiesofpolysaccharideextractedfromPhysalispubescensL..MethodsPolysaccharidePhysalispubescensL.fruitbyultrasonicmethod,thecontentinedbyspectrophotometry,theinvitroscavengingactivitiesofpolysaccharideonhy

3、droxylradicalandDPPH,anditsprotectiveeffectsonlipidperoxidationofliverhomogenateinratsogenateinrats.ConclusionTheseresultssuggestthatthepolysaccharideextractedfromPhysalispubescensL.hasgoodantioxidantactivitiesinvitro.　　Keya公司，2-硫代巴比妥酸上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，其他試劑均為國產(chǎn)分析純；5810R

4、型冷凍離心機(jī)德國Eppendorf公司，723型可見分光光度計(jì)山東高密彩虹分析儀器有限公司，RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司，BP221S型電子天平德國賽多利斯?！　?.2多糖的提取及初步分離純化稱取苦蘵鮮果1000g烘干，加一定量的水60in，8000r/min離心7min，上清液抽濾后濃縮，用醋酸乙酯加熱回流1h進(jìn)行除脂脫色［2］，再用Sevage法［3］去除蛋白得粗多糖。　　1.3醇沉條件的研究　　1.3.1濃縮比將粗多糖溶液濃縮后，分別加入4倍體積95%的乙醇，4℃下醇沉12h。多糖用一定量的蒸餾水

5、溶解后測定含量。　　1.3.2溫度取3份粗糖溶液分別加入4倍體積的95%乙醇，然后置于-20℃，4℃，室溫（25℃）進(jìn)行醇沉。溶解后分別測其多糖含量?！　?.3.3醇沉比取5份粗糖液分別以1∶1,1∶2，1∶3，1∶4，1∶5（糖液∶95%乙醇）比例加入乙醇。在4℃醇沉12h。溶解后測多糖含量?！　?.3.4醇沉?xí)r間［4］分別選擇4，8，12，16，18，20，24h進(jìn)行多糖含量檢測，其他條件均按摸索的最佳條件設(shè)置?！　?.3.5pH分別選擇pH為4，5，6，7，8，9,6個(gè)值進(jìn)行多糖含量檢測，其他條件均按摸索的最佳條件設(shè)置?！?/p>

6、　1.4體外抗氧化的研究　　1.4.1對(duì)·OH的抑制作用［5］采用亞鐵離子催化過氧化氫產(chǎn)生·OH（根據(jù)Fenton反應(yīng)原理），由于·OH可特異地使番紅褪色，根據(jù)褪色程度用比色法來測量·OH的含量。4ml體系中包含150mmol/L,pH=7.4的磷酸緩沖溶液1.5ml，260μg/ml番紅花紅0.2ml，0.56mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(Fe2+﹣EDTA)0.7ml,1%H2O20.8ml，各濃度糖液0.8ml。　　1.4.2對(duì)肝脂質(zhì)過氧化的抑制［6］過氧化脂質(zhì)的二級(jí)分解產(chǎn)物丙二醛能與硫代巴比妥酸反應(yīng)生成紅色產(chǎn)物，在532

7、nm處有最大吸收。大鼠脫頸處死后迅速分離肝組織，用生理鹽水洗凈,冰浴下勻漿，制成0.5%的肝勻漿液。取勻漿液各1ml，加入不同質(zhì)量濃度的糖液1ml和6mmol/L,EDTA-Na-Fe（Ⅱ）100μl,最后加60mmol/LH2O2100μl。以生理鹽水代替糖液和H2O2為空白，以生理鹽水代替糖液為對(duì)照，整個(gè)體系為2.2ml。在37℃下水浴1h后，加入1ml15%TCA終止反應(yīng)，再加入1ml體積分?jǐn)?shù)0.7%TBA,于沸水中顯色15min,冷卻后離心，測532nm處上清液的OD值。　　1.4.3對(duì)有機(jī)自由基DPPH的清除作用［7］

8、DPPH分光測定法的測定原理是依據(jù)DPPH在517nm處有一強(qiáng)吸收峰,其乙醇溶液呈深紫色。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí),由于與其單電子配對(duì)而使其吸收逐漸消失,其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系,因而可用分光法進(jìn)行定量分析?？寡趸钚砸郧宄鼶PPH自由基能力大小表示