蘆筍總皂苷含量測定的比色法研究

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1、蘆筍總皂苷含量測定的比色法研究作者：趙建華，宋擎，汪素芳，蘇強(qiáng)，張立偉【摘要】　　目的考察糖類、氨基酸及黃酮類物質(zhì)對茴香醛-硫酸法測定蘆筍總皂苷含量時(shí)的影響，并確定該法的最佳比色條件。方法選用菝葜皂苷元為對照品，采用茴香醛-硫酸法，在429nm處測定糖類、氨基酸及黃酮類物質(zhì)的吸光度，并利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化比色條件。結(jié)果在429nm處3類物質(zhì)除黃酮類有較小的末端吸收外均無明顯吸收，干擾較小。最優(yōu)比色條件為樣品揮干，加入1%茴香醛無水乙醇溶液0.2ml，100℃水浴30min，冷卻后測定。結(jié)論該法操作簡便，干擾小，比色條件經(jīng)濟(jì)，可靠，便于實(shí)際應(yīng)

2、用?！娟P(guān)鍵詞】蘆筍邊角料總皂苷茴香醛-硫酸法干擾因素考察比色條件優(yōu)化蘆筍AsparagusofficinalisLinn.，學(xué)名石刁柏，為百合科天門冬屬多年生草本植物，是一種藥食兩用的植物，其根莖入藥，性苦，微辛，微溫，功能溫肺下氣［1，2］。成分分析表明，蘆筍中含有游離氨基酸、維生素、微量元素硒等多種營養(yǎng)成分，以及甾體皂苷、多糖、黃酮類等藥用成分［3］，具有極高的藥用價(jià)值?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：蘆筍提取物對多種癌細(xì)胞均有抑制作用，具有降血脂、提高人體免疫功能、抗衰老等功能，其中，甾體皂苷為重要的物質(zhì)基礎(chǔ)［4］。國內(nèi)外　　2.2茴香醛-硫酸法

3、比色條件的優(yōu)化　　2.2.1正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選茴香醛-硫酸法比色條件設(shè)計(jì)L9（34）正交表對顯色劑濃度、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、顯色劑體積4因素進(jìn)行考察。水平因素見表1，測定結(jié)果及極差分析見表2，方差分析及最小二乘法分析結(jié)果見表3～4。表1正交實(shí)驗(yàn)因素水平表（略）表2正交實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果及極差分析結(jié)果（略）表3正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析表（略）表4各因素水平最小二乘法平均值（略）　從分析結(jié)果的R值得出，4因素對測定結(jié)果的影響順序?yàn)榉磻?yīng)溫度＞顯色劑體積＞反應(yīng)時(shí)間＞顯色劑濃度，最優(yōu)顯色條件為A3B2C3D1，即5%茴香醛無水乙醇液，吸取0.2ml，100℃水浴3

4、0min。　　查F值分布表可知，F(xiàn)0.05(2,2)=19.0，F(xiàn)0.01(2,2)=99.0，根據(jù)方差檢驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)F值大于F0.05小于等于F0.01時(shí)，該因素作用顯著，記為“*”。從表3得知，4個(gè)因素的F值均大于F0.05(2,2)小于F0.01(2,2)，因此判定4個(gè)因素對實(shí)驗(yàn)影響均較為顯著，根據(jù)F值大小排序，可以看到4個(gè)因素的影響次序?yàn)榉磻?yīng)溫度＞顯色劑體積＞反應(yīng)時(shí)間＞顯色劑濃度，其結(jié)果與極差分析結(jié)果相吻合?！　∮杀?中看到，取各因素最小二乘法平均值中的最大值，得到條件為顯色劑濃度5%，反應(yīng)時(shí)間30min，反應(yīng)溫度100℃，顯色劑

5、用量0.2ml，其結(jié)果與極差分析結(jié)果吻合。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)中5%茴香醛乙醇溶液與1%兩個(gè)濃度的差別很小，且5%對茴香醛用量較大，如果用1%濃度代替5%濃度，會大大節(jié)省顯色劑用量，因此在進(jìn)行最優(yōu)工藝驗(yàn)證時(shí)，同時(shí)對1%濃度條件進(jìn)行了平行實(shí)驗(yàn)，以觀察兩種濃度的差異。　　2.2.2最優(yōu)比色條件驗(yàn)證精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下菝葜皂苷元溶液1ml共10份，分別置于10支具塞試管中，揮干溶劑，試管從1～10標(biāo)號，其中1～5號試管加入5%茴香醛乙醇溶液0.2ml，6～10號試管中加入1%茴香醛溶液0.2ml，100℃水浴30min，取出冷卻，于429n

6、m下測定吸光度。結(jié)果見表5。表5最優(yōu)比色條件驗(yàn)證結(jié)果（略）對上表兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行雙樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果P=0.118>0.05，表明兩組實(shí)驗(yàn)方差是一致的，兩種濃度之間無顯著差異。從測得的吸光度來看，兩種濃度顯色劑的吸光度值均超過了正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，符合正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此將顯色劑濃度換為1%茴香醛乙醇是可行的。這也從另一角度說明1%的濃度已基本能夠反應(yīng)完全，而過量的茴香醛反而造成不必要的浪費(fèi)?！【C上所述，最后確定茴香醛-濃硫酸法顯色條件為1%茴香醛無水乙醇溶液，吸取0.2ml，100℃水浴30min。　　3結(jié)論考察了糖類、氨基酸及黃酮類對茴香醛-硫

7、酸法測定蘆筍邊角料中總皂苷含量時(shí)的干擾［10］，在429nm處菝葜皂苷元與蘆筍總皂苷均有明顯的吸收，而糖類和氨基酸幾乎沒有吸收，黃酮類有較小的末端吸收。結(jié)果說明，糖類和氨基酸對本法的干擾較小，黃酮類有一定干擾，為了準(zhǔn)確測定蘆筍中總皂苷含量，測定時(shí)可以考慮用差示分光光度法來扣除類黃酮物質(zhì)的干擾。其余6種常見比色法的同步研究結(jié)果表明［8］，糖類對乙酸酐濃硫酸法、濃硫酸法及香草醛-高氯酸法影響較大、而3類物質(zhì)對高氯酸法、香草醛-硫酸法及對二甲氨基苯甲醛法均影響較大，干擾明顯。因此，茴香醛-濃硫酸法對總皂苷測定專屬性要強(qiáng)于其余6種方法，另外，茴香醛

8、法中，菝葜皂苷元與總皂苷在測定波長429nm處呈現(xiàn)明確的吸收峰，響應(yīng)明顯，通過數(shù)次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，此吸收峰較為穩(wěn)定，優(yōu)于其余方法。正交實(shí)驗(yàn)及極差分析表明，4因素對測定結(jié)果的影響順序?yàn)榉?/p>