比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量論文

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1、比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量論文【摘要】目的建立甘草中甘草總皂苷含量的測(cè)定方法。方法用香草醛高氯酸試劑，在589nm處有最大吸收，并對(duì)比色條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果該法精密度高，1h內(nèi)穩(wěn)定，平均加樣回收率為99.03%。結(jié)論此法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于甘草總皂苷的測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】甘草；總皂苷；香草醛高氯酸DeterminationofTotalSaponinsinGlycyrrhizabyColorimetryAbstract：ObjectiveToestablishthemethodofdeterminationoftotalsaponinsinGly

2、cyrrhiza.MethodsUseVanillinHClO4asthechromogenicreagentanddetectthemaximumabsorptionatthe.Choosethebestchromogenicpreparationtodeterminethecontentsofthesamples.ResultsTheprecisionofthemethodishigh.Thecolorofthetreatedsamplesethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.Itmayb

3、eusedforthequantitativedeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza.Keyinosae）甘草屬（Glycyrrhiza）植物，為我國重要的傳統(tǒng)中草藥。甘草屬植物在世界上共有30余種，我國有8種.freelg溶解于甲醇中定容至10ml，濃度為1mg·ml-1，甘草（購于黑龍江省大慶市大同區(qū)）。2方法2.1最大波長的確定準(zhǔn)確吸取0.5ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于10ml具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于55℃水浴中加熱20min，立即取出用流水

4、冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml稀釋，搖勻，以不加標(biāo)準(zhǔn)品的樣品管為空白，于400～700nm波長處進(jìn)行掃描。2.2比色條件的優(yōu)化2.2.1最佳顯色時(shí)間的確定取5份0.2ml對(duì)照品溶液，分別置具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，各加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于60℃水浴中加熱不同時(shí)間（5，10，15，20，25min），立即取出用冷水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml，搖勻，于最大吸收波長處測(cè)定其吸收值。2.2.2最佳顯色溫度的確定分別取5份0.2ml對(duì)照品溶液，依上法操作，在不同溫度（50，55，60，65，70℃）水浴20min，同

5、上進(jìn)行測(cè)定。2.3顯色穩(wěn)定性的考察精確吸取標(biāo)準(zhǔn)樣溶液0.2ml，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色，在1h內(nèi)，每隔5min測(cè)定吸收值的變化情況。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精確吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3ml分別置于10ml具塞試管中，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色后測(cè)定吸光值，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次，以皂苷的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖得到回歸方程。2.5樣品待測(cè)液的制備準(zhǔn)確稱取脫脂后的甘草粉0.2g（40目）于10ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入甲醇4ml(含1%氨水)，加塞后放入超聲波清洗器中超聲1h，然后取出試管置于離心機(jī)中以3000r·min-1

6、離心15min，上清液作為待測(cè)液。2.6精密度的測(cè)定準(zhǔn)確吸取待測(cè)液60μl共6份，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色后測(cè)定吸收值。2.7加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確量取6份已知濃度的供試樣品25μl，再分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液30μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色后測(cè)定吸收值，計(jì)算加標(biāo)回收率。2.8樣品的測(cè)定吸取上述2.5項(xiàng)下提取純化的3種樣品溶液各60μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色后測(cè)定吸收值，根據(jù)工作曲線計(jì)算皂苷含量。3結(jié)果與討論3.1最大波長的確定香草醛－高氯酸是常用的一類顯色劑，顯色靈敏度高，試劑空白溶液色淺，常用作三萜皂苷的顯色劑。其反應(yīng)機(jī)理可能是皂苷在強(qiáng)氧化性

7、酸的作用下脫氫，氧化后再與香草醛加成。顯色后，香草醛－高氯酸能與皂苷反應(yīng)形成特征的紫紅色。掃描結(jié)果表明，甘草酸單銨鹽標(biāo)準(zhǔn)品溶液在589nm處有最大吸收，故選取589nm為測(cè)定波長。3.2比色條件的確定3.2.1最佳顯色時(shí)間的確定結(jié)果見圖1。3.2.2最佳顯色溫度的確定結(jié)果見圖2。3.3顯色的穩(wěn)定性顯色反應(yīng)的1h內(nèi)試樣的吸光值下降較?。–V＝0.68%），在1h內(nèi)測(cè)定的數(shù)據(jù)是基本穩(wěn)定的，可以滿足測(cè)定的要求。3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸曲線數(shù)據(jù)見表1。表1測(cè)定的回歸曲線數(shù)據(jù)（略）以3次測(cè)定的吸光值的平均值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以甘草酸單銨鹽量/mg為橫坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示，該

8、標(biāo)準(zhǔn)曲線的