比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量

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1、比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量【摘要】目的建立甘草中甘草總皂苷含量的測(cè)定方法。方法用香草醛高氯酸試劑，在589nm處有最大吸收，并對(duì)比色條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果該法精密度高，1h內(nèi)穩(wěn)定，平均加樣回收率為99.03%。結(jié)論此法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于甘草總皂苷的測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】甘草；總皂苷；香草醛高氯酸DeterminationofTotalSaponinsinGlycyrrhizabyColorimetry　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodofdeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza

2、.MethodsUseVanillinHClO4asthechromogenicreagentanddetectthemaximumabsorptionatthe.Choosethebestchromogenicpreparationtodeterminethecontentsofthesamples.ResultsTheprecisionofthemethodishigh.Thecolorofthetreatedsamplesethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.Itmaybeusedforthequan

3、titativedeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza.　　Keyinosae）甘草屬（Glycyrrhiza）植物，為我國(guó)重要的傳統(tǒng)中草藥。甘草屬植物在世界上共有30余種，我國(guó)有8種，分布在內(nèi)蒙、西北、東北等地。目前，被《中國(guó)藥典》認(rèn)定的甘草藥材原植物有3種［1］，即烏拉爾甘草、脹果甘草和光果甘草的根及根莖。其中以烏拉爾甘草分布最廣，產(chǎn)量最多，質(zhì)量最好。研究發(fā)現(xiàn)甘草屬植物中三萜類皂苷具有含量高、生理活性強(qiáng)的特點(diǎn)，不僅具有抗?jié)?、消炎、解毒等生理活性，今年研究還發(fā)現(xiàn)具有抗病毒、抗癌活性。皂苷定量分析方法的研究已有很多報(bào)道［2～7］，包

4、括重量法、比色法、薄層掃描法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）等。重量法具有測(cè)定值穩(wěn)定、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，但分析流程時(shí)間長(zhǎng)，操作繁瑣，試劑消耗量大，得到的皂苷中一般混有一定量的雜質(zhì)，使結(jié)果偏高，誤差較大。比色法一般采用香草醛－硫酸比色法［2］。張中偉發(fā)現(xiàn)香草醛－硫酸法穩(wěn)定性差，而香草醛高氯酸作為三萜皂苷常用的顯色劑，較香草醛硫酸的精密度高，且受糖類干擾較?。?］。薄層掃描法和高效液相法對(duì)測(cè)定樣品、設(shè)備要求較高，且只適合一些特定皂苷的測(cè)定。綜合考慮，以香草醛高氯酸作為顯色劑，測(cè)定甘草中總皂苷的含量，建立一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的方法。　　1器材　　1.1儀器721型分光光度計(jì)，上海

5、分析儀器廠；KQ50DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；AB204S型分析天平，METTLER公司；紫外掃描分光光度計(jì)，島津UV240?！　?.2試劑高氯酸，甲醇，香草醛，冰醋酸（以上試劑均為分析純），甘草酸單銨鹽標(biāo)準(zhǔn)品（甘草酸單銨鹽10mg溶解于甲醇中定容至10ml，濃度為1mg·ml-1，甘草（購(gòu)于黑龍江省大慶市大同區(qū)）。　　2方法　　2.1最大波長(zhǎng)的確定準(zhǔn)確吸取0.5ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于10ml具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于55℃水浴中加熱20min，立即取出用流水冷卻至室溫，加

6、入冰醋酸5ml稀釋，搖勻，以不加標(biāo)準(zhǔn)品的樣品管為空白，于400～700nm波長(zhǎng)處進(jìn)行掃描?！　?.2比色條件的優(yōu)化　　2.2.1最佳顯色時(shí)間的確定取5份0.2ml對(duì)照品溶液，分別置具塞試管中，70℃水浴揮干溶劑，各加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，搖勻，于60℃水浴中加熱不同時(shí)間（5，10，15，20，25min），立即取出用冷水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml，搖勻，于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收值?！　?.2.2最佳顯色溫度的確定分別取5份0.2ml對(duì)照品溶液，依上法操作，在不同溫度（50，55，60，65，70℃）水浴20min，同上進(jìn)行測(cè)定?！　?/p>

7、2.3顯色穩(wěn)定性的考察精確吸取標(biāo)準(zhǔn)樣溶液0.2ml，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色，在1h內(nèi)，每隔5min測(cè)定吸收值的變化情況?！　?.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精確吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3ml分別置于10ml具塞試管中，按2.1中的香草醛－高氯酸法顯色后測(cè)定吸光值，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次，以皂苷的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖得到回歸方程?！　?.5樣品待測(cè)液的制備準(zhǔn)確稱取脫脂后的甘草粉0.2g（40目）于10ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入甲醇4ml(含1%氨水)，加塞后放入超