植物離體快速繁殖和脫病毒技術(shù)PPT課件

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1、第5章植物離體快速繁殖和脫病毒技術(shù)5.1植物快速繁殖技術(shù)5.2無病毒植物的培養(yǎng)概念：所謂快速繁殖，就是將外植體在人工培養(yǎng)基和合適的條件下進行培養(yǎng)，以在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的個體的方法。特點：繁殖速度快；使用材料少，生產(chǎn)效率高，省時省工；可大量繁殖脫毒苗；利于種質(zhì)資源的保存和交換等；節(jié)約空間，不受季節(jié)限制，有利于植物的工廠化生產(chǎn)；在無菌條件下進行，不受病蟲害侵害。5.1植物快速繁殖技術(shù)快速繁殖過程一般包括四個階段，即無菌培養(yǎng)物的建立、芽的增殖、誘導(dǎo)生根和試管苗的馴化和移載。5.1.1無菌培養(yǎng)物的建立初代培養(yǎng)：進行離體繁殖時首先必須建立的無菌培養(yǎng)物。需

2、注意以下幾點：（1）保證無菌：外植體、培養(yǎng)基、培養(yǎng)室無菌狀態(tài)。（2）條件合適：合適的外植體；合適的培養(yǎng)基；適宜的培養(yǎng)條件。（3）技術(shù)過關(guān)：要熟練掌握無菌操作技術(shù)。（4）防止褐變：外植體褐變是指在接種后，其表面開始褐變，有時甚至?xí)拐麄€培養(yǎng)基褐變的現(xiàn)象。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活，將酚類化合物氧化成醌類物質(zhì)，它們多呈棕褐色，會抑制其它酶的活性，從而影響所接種外植體的培養(yǎng)。褐變的主要原因①植物種類和基因型由于多酚氧化酶活性上的差異，不同品種間的褐變現(xiàn)象是不同的。②取材部位和生理狀態(tài)處于幼齡期的植物材料褐變程度較淺，而從已經(jīng)成年的植株采收的外植

3、體，由于含醌類物質(zhì)較多，因此褐變較為嚴(yán)重。③培養(yǎng)基成分無機鹽濃度過高、細胞分裂素的水平過高等都會刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐變現(xiàn)象加深。④培養(yǎng)條件不當(dāng)如果光照過強、溫度過高、培養(yǎng)時間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速褐變程度。減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的方法①選擇合適的外植體一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。②合適的培養(yǎng)條件無機鹽成分、植物生長物質(zhì)水平、適宜溫度等均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。③使用抗氧化劑在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸、PVP等抗氧化劑能夠減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。另外，使用0.1%-0.

4、5%的活性炭對防止褐變也有較為明顯的效果。④連續(xù)轉(zhuǎn)接對容易褐變的材料可間隔12~24h的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過連續(xù)處理7-l0d后，褐變現(xiàn)象便會得到控制或大為減輕。(3)誘導(dǎo)胚狀體形成是由植物器官、組織和細胞培養(yǎng)直接發(fā)生類胚結(jié)構(gòu)，最后以肧狀體成苗的方式。在組織培養(yǎng)條件下胚狀體的發(fā)育過程類似于合子胚的發(fā)育：細胞經(jīng)脫分化后，發(fā)生持續(xù)細胞分裂增殖，并依次經(jīng)過原胚期、球形胚期、心形胚期、魚雷形胚期和子葉期，進而成為成熟的胚狀體。肧狀體途徑優(yōu)點是增值率高，同時具胚根和胚芽，免去生根一步；可用于制作人工種子，便于運輸和保存。缺點是肧狀體成苗率低，遺傳

5、性狀不穩(wěn)定。5.1.3誘導(dǎo)生根MS、B5、White等培養(yǎng)基，都可用于誘導(dǎo)生根，但是其含鹽濃度要適當(dāng)加以稀釋，它們都抑制根的發(fā)生。應(yīng)將它們降低到1／2，1／3或1／4，甚至更低的水平。生根培養(yǎng)基適當(dāng)加大生長素的濃度，不用或少用細胞分裂素，生長素濃度在1-10mg/l，使用較多的是NAA，其次為IAA和IBA。培養(yǎng)基中蔗糖的濃度降低到1.0-1.5%，以增強植株的自養(yǎng)能力。培養(yǎng)基不宜過硬以免影響生根。為提高小植株的光合能力，可將光強度增加到3000-10000lux。5.1.4試管苗的馴化和移栽馴化或煉苗：為了適應(yīng)移栽后較低濕度和較高光強等環(huán)境條件，能順利

6、進行自養(yǎng)，必須有一個逐步鍛煉和適應(yīng)的過程，這個過程叫馴化或煉苗。移栽前的練苗移栽前可將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛煉2—3d，讓試管苗接受強光的照射，或培養(yǎng)基中加入矮壯素等生長延緩劑等。使苗長得壯實起來，然后再開口練苗1—2d，經(jīng)受較低濕度的處理，以適應(yīng)將來自然濕度的條件。移栽和幼苗的管理從試管中取出發(fā)根的小苗，用自來水洗掉根部粘著的培養(yǎng)基，要全部除去，以防殘留培養(yǎng)基滋生雜菌。但要輕輕除去，應(yīng)避免造成傷根。栽植時用一個筷子粗的竹簽在基質(zhì)中插一小孔，然后將小苗插入，注意幼苗較嫩，防止弄傷，栽后把苗周圍基質(zhì)壓實，栽前基質(zhì)要澆透水。栽后輕澆薄水。再將苗移入高濕

7、度的環(huán)境中。搭設(shè)小拱棚，以減少水分的蒸發(fā)，保證空氣濕度達90%以上。5.1.5快速繁殖中應(yīng)注意的問題（1）遺傳穩(wěn)定性外植體的來源：不同種、同一種的不同品種以及同一植株的不同器官發(fā)生變異頻率不同。繼代培養(yǎng)：繼代培養(yǎng)的時間和次數(shù)是造成變異重要因素。再生植株發(fā)生方式：莖芽直接增殖、外植體直接形成不定芽方式或愈傷組織誘導(dǎo)不定芽方式，變異率依次增強。植物生長物質(zhì)：是誘導(dǎo)變異的重要原因之一。（2）玻璃化現(xiàn)象定義：當(dāng)植物材料不斷地進行離體繁殖時，有些培養(yǎng)物的嫩莖、葉片往往會呈半透明水漬狀，這種現(xiàn)象通常稱為玻璃化。特點：外觀形態(tài)有明顯異常；體內(nèi)含水量、礦質(zhì)元素、糖類、纖

8、維、蛋白質(zhì)等基本成分含量有變化，一些酶活和內(nèi)源激素含量有變化。影響玻璃化苗發(fā)生的