軟骨脫細胞基質(zhì)復合脂肪源性干細胞構(gòu)建軟骨組織的實驗研究

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1、軟骨脫細胞基質(zhì)復合脂肪源性干細胞構(gòu)建軟骨組織的實驗研究.L.編輯。作者:王兆杰,安榮澤,于立志,張強,齊新文,楊晉【摘要】[目的]探討軟骨脫細胞基質(zhì)支架材料的制備,及其體外復合脂肪源性干細胞構(gòu)建軟骨組織的技術方法。[方法]成年新西蘭大白兔脂肪源性干細胞獲得,培養(yǎng),擴增。成年新西蘭大白兔新鮮軟骨,低溫凍干12h,后經(jīng)曲拉通、DNA、RNA酶等處理制備成為軟骨脫細胞基質(zhì)支架材料,終濃度為2×107/L的脂肪干細胞種植于軟骨脫細胞基質(zhì)中于軟骨細胞方向誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)2周,構(gòu)建軟骨組織。新鮮制備的軟骨脫細胞基質(zhì)及構(gòu)建的軟骨組織分別行組織學、免疫組織化學及透射電鏡檢測。[結(jié)果]實驗制備的軟骨脫

2、細胞基質(zhì)支架材料內(nèi)無細胞結(jié)構(gòu)存在,僅殘留空白軟骨陷窩。具有合適的孔隙率和孔徑大小;復合脂肪源性干細胞后細胞向材料內(nèi)部遷移,粘附,生長良好。部分載體內(nèi)細胞Ⅱ型膠原免疫組化染色陽性。[結(jié)論]軟骨脫細胞基質(zhì)可作為支架材料應用于軟骨組織工程,復合脂肪源性干細胞培養(yǎng)可成功構(gòu)建軟骨組織?!娟P鍵詞】軟骨組織;脫細胞基質(zhì);脂肪源性干細胞  Abstract:[Objective]Toinvestigatethemethodsofpreparingacellularcartilaginousmatrix(ACM)andconstructingthetissueengineeredcartilagece

3、lls(ADSCs)seededacellularcartilaginousmatrixinvitro.[Method]TheADSCsadultNeplifiedinvitro.FreshcartilageisolatedfromadultNeatrixatafinaldensityof2×107/Landculturedinchondrogenicdifferentiationmediumfortmunohistochemistryandtransmissionelectronmicroscope(TEM)inethefreshACMandtissueengineeredcar

4、tilage.[Result]Thetestofhematoxylineosin(HE)stainingandTEMshoovedcells.TheACMhadsuitableintervalporosityandaperturesize.AfterintegratedigratedintotheACMandadheredtothesurfaceofmaterialandgreediumfortmunohistochemicalstainingoftypeⅡcollagenshoaterialhadenhancedexpressionoftypeⅡcollagen.[Conclus

5、ion]ACMcanbeusedasscaffoldmaterialincartilagetissueengineering.Ifitedium,ACMcanbeusedtoconstructcartilagetissuesuccessfully.  Keyatrix;adiposedrivedstemcells  關節(jié)軟骨因損傷或退行性病變引起缺損后,自身修復能力十分有限。近年來,軟骨組織工程的迅速發(fā)展,為解決這個難題提供了新的途徑[1~3]。而尋找一種合適的軟骨細胞載體則是當前軟骨組織工程研究的焦點之一。脫細胞基質(zhì)是近幾年發(fā)展起來的天然支架材料,因其去除了組織中的抗原性成分,故

6、具有良好生物相容性,在組織工程中應用廣泛[4]?! ?001年ZukPA等[5]從人和大鼠的脂肪組織中發(fā)現(xiàn)了具有自我更新能力,活力持久及多向分化潛能的細胞并命名為脂肪源性干細胞。2003年GimbleJ、GuilakF[6]又在不同誘導方案下誘導脂肪源性干細胞向脂肪細胞、成骨細胞、肌肉細胞、心肌細胞、神經(jīng)細胞、軟骨細胞等分化進一步證實其干細胞的特性。本實驗采用軟骨脫細胞基質(zhì)復合脂肪干細胞的方法體外構(gòu)建組織工程軟骨,探討軟骨脫細胞基質(zhì)作為軟骨組織工程支架材料的可能性。  1材料與方法  1.1材料  1.1.1實驗動物成年新西蘭大白兔,體重約為2.5~4kg,廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供

7、,SPF級?! ?.1.2主要試劑胎牛血清(中國醫(yī)學科學院生物工程研究所);Ⅰ-型膠原酶(Gibco);免疫組化SP試劑盒(天津海洋生物);TritonX100(北京拜爾迪生物工程有限公司);Typsin(華美生物工程有限公司);EDTA(Invitrogen美國);TGFβ1(Sigma美國)。  1.1.3主要儀器相差倒置顯微鏡(德國LEica);調(diào)溫震蕩培養(yǎng)箱(金壇富華);透射電鏡(日本Hitachi);熒光顯微鏡系統(tǒng)(德國LEIca);液氮生

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