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1、響應(yīng)面法優(yōu)化蛹蟲草菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究作者：董媛朱靖宇王虎義左陶馬東宵滕利榮【摘要】目的利用單因素及響應(yīng)面分析法優(yōu)化蛹蟲草菌絲體多糖超聲提取工藝。方法通過單因素實(shí)驗(yàn)選取實(shí)驗(yàn)因素與水平，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以液料比、超聲功率、提取時(shí)間為響應(yīng)因子，進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，并與傳統(tǒng)水提法進(jìn)行比較分析。結(jié)果超聲提取蛹蟲草菌絲體中多糖的最佳工藝條件為：提取時(shí)間504s，提取功率466)優(yōu)化多糖提取工藝的研究報(bào)道較少［5］。響應(yīng)面分析法（ResponseSurfaceMethodology，RSM）,將數(shù)學(xué)與統(tǒng)計(jì)學(xué)相結(jié)合，采用多元二次回歸方法作為函數(shù)估計(jì)的工具來擬合因素與響應(yīng)值之間的函
2、數(shù)關(guān)系［6］，依此可對(duì)函數(shù)的響應(yīng)面和等高線進(jìn)行分析來尋求最佳工藝參數(shù)。本工藝在蛹蟲草菌絲體多糖的提取過程中，以液體深層發(fā)酵獲得蛹蟲草菌絲體為原料，將單因素和響應(yīng)面分析法應(yīng)用于超聲波提取蛹蟲草菌絲體多糖，研究了超聲提取的條件及其對(duì)提取結(jié)果的影響，并與傳統(tǒng)水浸提法進(jìn)行了比較，為其工藝路線的改造，降低生產(chǎn)成本以及工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的理論參考。1材料與儀器蛹蟲草菌種（CGMCC5.0699），購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；蒽酮，濃硫酸，3,5-二硝基水楊酸，葡萄糖，所有試劑均為分析純；HZQ-F160型全溫振蕩培養(yǎng)箱（哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司），MLS-3750型高壓自動(dòng)滅菌鍋（日本SANYO
3、），超凈工作臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公司），5810R型高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf），JY92-Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎儀（廈門精密儀器有限公司），UV-3150紫外分光光度計(jì)（日本島津），BP221S電子天平（德國(guó)賽多利斯）。2方法2.1多糖的測(cè)定2.1.1總糖的測(cè)定蒽酮－硫酸法［7］。2.1.2還原糖的測(cè)定DNS法［8］。2.1.3菌絲體多糖提取率的計(jì)算多糖含量=總糖含量-還原糖含量多糖提取率(%)=［多糖含量(g)/菌絲體質(zhì)量(g)］×l00％2.2菌絲體多糖的超聲提取方法液體深層發(fā)酵獲得蛹蟲草菌絲體，冷凍干燥至恒重，粉碎，過60目篩。分別稱取0.1g菌絲體干粉，按一定液料比加入一定量去離
4、子水，水浴中超聲波提取一定時(shí)間。提取液經(jīng)12000r/min，4℃，離心10min，上清測(cè)定總糖和還原糖的含量。2.3菌絲體多糖提取單因子實(shí)驗(yàn)在提取過程中，利用單因子實(shí)驗(yàn)對(duì)影響多糖提取率的液料比、超聲功率、提取時(shí)間3個(gè)主要因素進(jìn)行考察。2.4菌絲體多糖提取中心組合實(shí)驗(yàn)在單因子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上根據(jù)Box-Benhnken的中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用響應(yīng)面法在3因素3水平上對(duì)菌絲體多糖的提取條件進(jìn)行優(yōu)化。按最佳提取條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)并考察提取次數(shù)對(duì)提取率的影響。3結(jié)果3.1超聲波提過程中的單因素影響3.1.1提取時(shí)間對(duì)菌絲體多糖提取率的影響在液料比40∶1，提取功率300W水浴中分別超聲提取60，12
5、0，180，240，300，360，420，480，540，600s，然后測(cè)定菌絲體多糖提取率，結(jié)果見圖1。從結(jié)果可以看出，提取時(shí)間480s時(shí)多糖得率最大。提取時(shí)間低于480s時(shí)多糖得率隨著提取時(shí)間的增加而增加，大于480s時(shí)多糖得率反而有所降低。3.1.2超聲功率對(duì)菌絲體多糖提取率的影響菌絲體干粉按液料比40:1加入蒸餾水，分別于功率200，240，280，320，360，400，440，480，520］.鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2004：24.［2］王琦，韓曉龍.蛹蟲草對(duì)老年大鼠自由基代謝影響的研究［J］.遼寧師范學(xué)報(bào)，2002，4（4）：104.［3］熊中良,鄧春生.真菌多糖免疫活性
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