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1、咳喘落口服液對哮喘模型小鼠肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡及調(diào)控因素【摘要】觀察咳喘落口服液對哮喘小鼠嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil,EOS）凋亡及調(diào)控因素的影響，旨在進(jìn)一步闡明咳喘落抑制氣道炎癥的機(jī)制。方法：56只BALB/c小鼠分為正常組、模型組、咳喘落組和西藥(強(qiáng)的松龍)組。除正常對照組外，其余各組小鼠用卵白蛋白和硫酸鋁鉀致敏激發(fā)BALB/c小鼠，復(fù)制哮喘模型。在不同時相（末次激發(fā)后0h，第3、7和14天）分別采用改良的Giemsa染色法檢測各組小鼠肺組織中EOS數(shù)量；免疫組化結(jié)合圖像分析方法檢測各組小鼠肺組織中Fas、Fas配體（Fasligand,FasL）和Bcl?XL表達(dá)的
2、情況；采用TdT介導(dǎo)的帶生物素dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)（terminaldeoxynucleotidyltransferase?mediatedbiotin?dUTPnickendlabeling,TUNEL）檢測EOS凋亡率。結(jié)果：末次激發(fā)后第3、7和14天，哮喘模型組小鼠氣道炎癥明顯，以末次激發(fā)后第3天最為嚴(yán)重，而咳喘落組、西藥組各時相氣道組織炎癥均明顯減輕，EOS數(shù)量低于模型組（P<0.05）?？却浣M末次激發(fā)后第3天，其肺組織內(nèi)FasL、EOSFas陽性面積和凋亡率較模型組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），且凋亡率達(dá)頂峰，而Bcl?XL的陽性面積及EOS數(shù)量
3、低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；末次激發(fā)后第7和14天，中藥組EOS中Fas陽性面積和Bcl?XL的陽性面積較模型組明顯下降（P<0.01）；且第14天，其肺組織中FasL表達(dá)和EOS凋亡率均明顯下降（P<0.01）。西藥陽性對照組的作用與中藥治療組類似。結(jié)論：哮喘小鼠存在以EOS浸潤為主的氣道炎癥，同時伴有凋亡受抑和凋亡延遲。咳喘落可以提高炎癥早期肺組織EOS凋亡率，可能是通過減少EOS，提高FasL、Fas表達(dá)和降低Bcl?XL表達(dá)實(shí)現(xiàn)的?！娟P(guān)鍵詞】支氣管哮喘;復(fù)方;肺嗜酸性粒細(xì)胞增多;細(xì)胞凋亡;Fas配體;Fas;Bcl?XL;小鼠 Objec
4、tive:ToexplorethemechanismofKechuanluooralliquid,apoundChineseherbalmedicine,ininhibitingallergicairmationbyobservingtheeffectsofKechuanluooneosinophil(EOS)apoptosisanditsregulationfactorsinasthmaticmice.Methods:Fifty?sixBALB/cmicelydividedintonormalcontrolgroup(n=16),untreatedgroup(n=16),annhe
5、im公司產(chǎn)品；硫酸鋁鉀，上海化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號為020203?！ ?.2實(shí)驗方法 1.2.1模型分組與處理 56只BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、西藥對照組和咳喘落組。正常對照組和模型組各16只，西藥對照組和咳喘落組各12只。除正常對照組外，根據(jù)國外報道[4］的方法略加改動，用卵白蛋白致敏激發(fā)BALB/c小鼠，復(fù)制哮喘模型。3組小鼠于第1天和第14天予腹腔注射卵白蛋白硫酸鋁鉀混合液（每毫升含500μg卵白蛋白和100mg硫酸鋁鉀）0.2ml致敏。第14天鼻內(nèi)滴入卵白蛋白0.05ml（100μg），第25、26和27天鼻內(nèi)滴入卵白蛋白0.05ml（50μg）
6、，鼻內(nèi)滴入前均予腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉（40mg/kg）。正常對照組用等量生理鹽水替代卵白蛋白和硫酸鋁鉀進(jìn)行腹腔注射及鼻內(nèi)滴入。第27至40天，正常對照組和模型組均胃飼生理鹽水，咳喘落組灌胃咳喘落口服液30ml/(kg·d)，西藥對照組灌胃強(qiáng)的松龍片10mg/(kg·d)。于末次激發(fā)后當(dāng)天（第27天），對照組和模型組分別隨機(jī)處理4只，末次激發(fā)后第3（第30天）、7（第34天）和14天（第41天），各組分別隨機(jī)處理4只，收集左上肺組織標(biāo)本待測?！ ?.2.2組織學(xué)及光鏡觀察 肺組織用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察并拍照?！ ?.2.3肺組織中EOS測定 應(yīng)
7、用改良的Giemsa染色法［5］，EOS核呈藍(lán)色，顆粒呈紅色。測定前先用細(xì)胞計數(shù)板上的刻度對系統(tǒng)進(jìn)行定標(biāo)，隨機(jī)選取內(nèi)徑0.1～0.2mm的細(xì)支氣管作為測定對象，通過顯微鏡×400倍攝取圖像，胞漿內(nèi)顆粒呈紅色為陽性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)取3個視野，取其均值為陽性細(xì)胞數(shù)，即EOS計數(shù)?！ ?.2.4肺組織中EOS凋亡檢測 采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的帶生物素dUTP切口末端標(biāo)記技術(shù)（terminaldeoxynucleotidyltransferase?med
