人卵巢癌中多藥耐藥基因與多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)及其臨床意義

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1、人卵巢癌中多藥耐藥基因與多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)及其臨床意義【關(guān)鍵詞】卵巢癌［Abstract］ObjectiveTostudytherelationshipbetultidrugresistancegene（MDR1），multidrugresistanceprotein（MRP）otherapybeforeoperation.MethodsTheexpressionofMDR1andMRPin68casesofovariancancerand20normalovarytissueerasechainreaction（RT-PCR）

2、.ResultsInnormalovaryandovariancancer，thepositiveofMDR1or（P<0.05），butnosignificantrelationshiptothehistologicaltype（P>0.05）.ThenonresponderstobinationchemotherapyexhibitedhigherrationsofMDR1andMRPexpressionthantheresponders（P<0.05）.ConclusionMulitplegeneexpre

3、ssionisinvolvedindrugresistanceinovariancancer.TheexpressionofMDR1orMRPishigherinovariancancerthanthatinnormalovarytissue.TheexpressionofMDR1andMRPiscloselyrelatedtothetumordifferentiationandtheresponsetochemotherapy.［Keys;genesexpression;MDR1;MRP卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)主要的惡性腫瘤之一，其病

4、死率居婦科腫瘤首位，占女性癌癥患者病死率的第5位。化療是治療卵巢惡性腫瘤的主要輔助手段，但癌細(xì)胞的耐藥嚴(yán)重妨礙了抗腫瘤藥物效能的發(fā)揮。國內(nèi)外研究表明，腫瘤耐藥涉及細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低、藥物靶分子改變、代謝解毒、DNA損傷修復(fù)功能增強(qiáng)等多種機(jī)制，與多種耐藥相關(guān)基因有關(guān)［1］。本研究采用定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PDR）同時測定多藥耐藥基因（MDR1），多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）在卵巢惡性腫瘤組織中表達(dá)。旨在探討卵巢癌MDR1和MRP表達(dá)與化療耐藥的關(guān)系，從而尋找一種可以預(yù)測化療耐藥的標(biāo)志物。1資料與方法1.1一般資料選擇2005年

5、1月~2006年12月間在我院婦產(chǎn)科手術(shù)治療的卵巢癌患者共68例，年齡19~65歲，平均51.7歲。所有手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)病理檢查證實。另取正常卵巢組織20例作為對照（系子宮肌瘤手術(shù)同時切除卵巢獲得的正常卵巢組織）。卵巢癌包括子宮內(nèi)膜樣癌10例，透明細(xì)胞癌8例，漿液性乳頭狀囊腺癌（漿液癌）25例，黏液性乳頭狀囊腺癌（黏液癌）17例，無性細(xì)胞瘤2例，內(nèi)胚竇瘤6例。其中，臨床Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期42例，Ⅳ期12例，患者均在術(shù)后1周內(nèi)開始化療。共接受了6~13個療程的化療?；煼桨敢訡AP（順鉑+阿霉素+環(huán)磷酰胺）或泰素加PC（順鉑+環(huán)磷酰

6、胺）方案為主。1.2方法1.2.1標(biāo)本收集所有病例均為初診患者，術(shù)前均未接受化療，在手術(shù)切除后1h內(nèi)，將新鮮癌組織標(biāo)本置于液氮中保存。1.2.2引物設(shè)計根據(jù)從Genbank中查到的這兩種基因序列設(shè)計聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）引物，見表1，內(nèi)參基因為肌動蛋白（β-actin）。表1PCR引物及產(chǎn)物長度1.2.3RNA提取參照TRIZOL試劑盒（美國GIBCOBRL公司）說明書進(jìn)行提取RNA。1.2.4逆轉(zhuǎn)錄（RT）合成CDNA將RNA稀釋為1μg/μl。取5μlRNA加5×RTbuffer4μl，dNTP（2mmol/L）1μl，Olig

7、o（dT）（100μg/μl）2μl，三蒸水3μl，65℃水浴變性5min，加Rnasin（20u/μl）0.5μl，AMV（10u/μl）1μl，（均為美國Promega公司產(chǎn)品）。42℃水浴60min。95℃5min滅活A(yù)MV。1.2.5PCR擴(kuò)增擴(kuò)增體系：10×buffer1μl，dNTP（2mmol/L）1μl，引物（5μmol/l）各1μl，甲酰胺5μl，Cdna100ng，TagDNA聚合酶（4μg/μl）0.3μl，加三蒸水補(bǔ)充體積至10μl。94℃變性5min后進(jìn)入循環(huán)，94℃變性40s，55℃（68℃）退火40s，

8、72℃延伸1min，30個循環(huán)后72℃10min。1.2.6電泳80V電壓下，2%瓊脂糖凝膠電泳1h，紫外光下檢查有無特異條帶。1.2.7PCR產(chǎn)物定量分析用KODAK數(shù)字成像系統(tǒng)對PCR產(chǎn)物照相，用軟件分析條帶吸光度值。1.2.8臨