資源描述:
《腫瘤厭氧靶向雙自殺基因治療系統(tǒng)的構(gòu)建的論文》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、腫瘤厭氧靶向雙自殺基因治療系統(tǒng)的構(gòu)建的論文【摘要】目的利用嬰兒雙歧桿菌對實體瘤低氧區(qū)的靶向效應(yīng),構(gòu)建腫瘤厭氧靶向雙自殺基因治療系統(tǒng)ptrkh2pst/cd和ptrkh2pst/uprt。方法用pcr的方法從質(zhì)粒pgex/cd和pgex/uprt中擴增出cd基因和uprt基因,雙酶切cd基因、uprt基因和質(zhì)粒ptrkh2pst,分別連接后重組于大腸桿菌中。之后用電轉(zhuǎn)化的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入嬰兒雙歧桿菌中。用rtpcr檢測該系統(tǒng)mrna水平的表達,sdspage檢測該系統(tǒng)在蛋白質(zhì)水平的表達。在黑色素瘤b16f10細胞上檢測該系統(tǒng)的體外腫瘤細胞殺傷效果。結(jié)果成功地將cd基因和u
2、prt基因轉(zhuǎn)入了質(zhì)粒ptrkh2pst,cd基因和uprt基因的測序結(jié)果表明序列與genebank公布的序列一致。rtpcr檢測到cd和uprtmrna水平的明顯表達。在含有cd基因的嬰兒雙歧桿菌細胞全蛋白中發(fā)現(xiàn)了cd蛋白質(zhì)的表達,在含有uprt基因的嬰兒雙歧桿菌上清液中發(fā)現(xiàn)了uprt蛋白質(zhì)的表達。黑色素瘤細胞的低存活率證明了ptrkh2pst/cd、ptrkh2pst/uprt自殺基因治療系統(tǒng)對黑色素瘤的顯著殺傷作用。結(jié)論腫瘤厭氧靶向雙自殺基因治療系統(tǒng)ptrkh2pst/cd、ptrkh2pst/uprt構(gòu)建成功并顯示出殺傷腫瘤細胞的作用?!娟P(guān)鍵詞】嬰兒雙歧桿菌;自殺基
3、因;cd基因;uprt基因;腫瘤靶向性constructionofanaerobicinfantbifidobacterialmediatedptrkh2pst/cdandptrkh2pst/uprtdualsuicidesystemfortumortargettinggenetherapyyepeng1,lizhuhua2,yangyanbiao3,entofpathophysiology,edicalsciencesandforensicmedicine,sichuanuniversity,chengdu610041,china;2.departmentofpathop
4、hysiology,luzhoumedicalcollege;3.thefirstpeople'shospitaloflanzhoucorrespondingauthor:ail:intotumorhypoxiatargetingcarrierofinfantbifidobacterium.methodscdgeneanduprtgeneplifiedfrompgex/cdandpgex/uprtbypcr.thecdgene,uprtgeneidptrkh2pst,thenconstructedtidsofptrkh2pst/cdandptrkh2pst/uprtusin
5、gelectroporation.theexpressionofcdanduprtinbifidobacteriumonmelanomab16f10cellseasuredusingmethylthiazolyltetrazolium(mtt)assay.resultsthecdgeneanduprtgeneidptrkh2pst.thesequencingresultsofcdgeneanduprtgeneindualsuicidesystemareconsistentrnaandproteinlevelofcdanduprt.thesurvivalrateofmelanoma
6、b16f10cellstreated1.7%~13.3%,81.3%~91.7%,26.7%~58.3%and78.3%~86.7%,respectively.conclusioncdgeneanduprtgene.thisdualsuicidegenetherapysystemshoorcells.keyinfantis;suicidegene;cdgene;uprtgene;tumortargeting1材料與方法1.1材料質(zhì)粒ptrkh2pst由復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院黃教授贈予,嬰兒雙歧桿菌2001株由四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院贈予,質(zhì)粒純化試劑盒和pcr產(chǎn)物純化試劑盒購自ome
7、gaco.,pcr反應(yīng)試劑盒和dnamarker購自promegaco.(usa),bamhi,sali購自takaraco.,其他試劑均為國產(chǎn)分析純。.1.2方法以純化質(zhì)粒pgex/cd和pgex/uprt作為pcr反應(yīng)的模板。根據(jù)cd基因在genebank(nc0009131)中的序列設(shè)計引物,上游引物為:5′ccgggatccctaacaatgtcgaataac3′,下游引物為:5′gtggtcgacgaattctgtaacccagtc3′