高效液相色譜法測定復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮的含量

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1、高效液相色譜法測定復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮的含量【摘要】目的建立復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，用SymmetryC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，以甲醇0.4%磷酸溶液（52∶48）為流動相，流速為1.0ml·min-1，檢測波長360nm，柱溫35℃。結(jié)果該法線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.35%,　RSD為1.17%(n=5)。結(jié)論該法操作簡便，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可作為復(fù)方銀杏葉片的質(zhì)量控制方法?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方銀杏葉片；黃酮；槲皮素；山柰素；異鼠李素；高效液相色譜法　　Abstract：ObjectiveTo

2、establishthedeterminationmethodofflavonoidsinpoundGinkgobilobaLeavesTablets.MethodsTheanalysisedonaSymmetryC18column（4.6mm×250mm,5μm）ethanol0.4%phosphoricacid(52:48)asmobilephaseataflol·min-1,andatacolumntemperatureof35℃.Thedetection.ResultsThelinearityofthismethodplesethodisconvientination

3、offlavonoidsandcanbeusedtoevaluatethequalityofpoundGinkgobilobaLeavesTablets.　　Keypferol；Isorhamin；HPLC　　復(fù)方銀杏葉片是由銀杏葉提取物和廣西野葛根提取物等制成的復(fù)方制劑，具有活血化淤，降低血脂，清除自由基和抗衰老等功效和作用［1］。銀杏葉中所含的槲皮素、山柰素、異鼠李素等黃酮化合物為其主要有效成分之一。銀杏葉中黃酮化合物的測定方法很多，如導(dǎo)數(shù)光譜法［2］，近紅外光譜法［3］，分光光度法［4］，示波極譜法［5］，熒光光度法［6］，庫侖滴定法［7］，毛細(xì)管電泳法［8］和高效液相色譜

4、法［9］等。而有關(guān)銀杏葉和野葛根兩者配方制劑中銀杏總黃酮含量測定方法尚未見報道。本文采用高效液相色譜法測定復(fù)方銀杏葉片中槲皮素、山柰素、異鼠李素等黃酮化合物的含量，方法快速簡便，分離效果良好，專屬性強(qiáng)?？捎糜趶?fù)方銀杏葉片的質(zhì)量控制?！　?儀器與試藥　　1.1儀器美國PerKinElmer公司Series200高效液相色譜儀（包括Series200紫外檢測器、Series200二元泵、600Series接口及色譜工作站）?！　?.2試藥槲皮素、山奈素、異鼠李素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為10081200406，110861200405，110860200407）

5、。復(fù)方銀杏葉片為本課題組在廣西科技廳三項基金資助下研制的新產(chǎn)品。甲醇為色譜純，水為高純水，磷酸為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件　SymmetryC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，美國l·min-1，檢測波長360nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量20μl。　　2.2溶液制備　　2.2.1對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素、山柰素、異鼠李素對照品適量（15.6，17.0，10.0mg）置100ml量瓶中，加甲醇微熱使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。　　2.2.2供試品溶液的制備　取本品10片，除去包衣，研細(xì)，精密稱取適量（約含銀杏總黃酮醇苷19.2m

6、g），置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30min，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。　　2.2.3陰性對照溶液的制備取處方中除銀杏葉提取物以外的其余藥材和輔料，按規(guī)定工藝制備成片劑后，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液?！　?.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取上述對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml

7、，分別置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件測定，以對照品濃度C（μg·ml-1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下：　　槲皮素：A=80074C-52255，r=0.9994，線性范圍為15.6～78.0μg·ml-1　　山柰素：A=63168C+35558，r=0.9982，線性范圍為17.0～85.0μg·ml-1　　異鼠李素：A=60465C+20840，r=0.9996，線性范圍為10.0～50.0μg·ml-1　　2