多糖的提取分離工藝研究

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1、多糖的提取分離工藝研究多糖是由單糖連接而成的多聚物，人們對多糖的研究已經有很長時間的歷史，對多糖的初始研究可追溯到1936年Shear對多糖抗腫瘤活性的發(fā)現，至20世紀50年代，陸續(xù)發(fā)現一些真菌多糖和高等植物多糖具有明顯的抑瘤活性。最近又發(fā)現許多中藥多糖還具有降血糖作用。70年代以來，科學家們發(fā)現多糖及糖復合物在生物體內不僅是作為能量資源和構成材料，重要的是它存在于一切細胞膜結構中，參與生命現象中細胞的各種活動。多糖類物質是所有生命有機體的重要組成部分，廣泛存在于動物、植物、和微生物細胞壁中，是生物體內除核酸和蛋白質以外的又一類重要的生物分子。科

2、學研究已經確認糖類物質具有許多生物活性，包括抗腫瘤、免疫、降血糖和抗病毒等，而且對機體幾乎無毒副作用。中藥多糖因具有增強機體免疫功能及抗腫瘤降血糖等藥理作用，而且?guī)缀鯖]有毒性與副作用，因此引起國內外藥理學家、生物學家和化學家們的關注?！　?.多糖的提取工藝　　1.1水提法　　用水作溶劑來提取多糖是最常用的方法之一，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提。水提取的多糖多數是中性多糖。一般植物多糖提取多數采用熱水浸提法，該法所得多糖提取液可直接或離心除去不溶物；或者利用多糖不溶于高濃度乙醇的性質，用高濃度乙醇沉淀提純多糖；但由于不同性質或不同相對分子質

3、量的多糖沉淀所需乙醇濃度不同，它也可以用于樣品中不同多糖組分的分級分離；還可按多糖不同性質在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離；其中，以乙醇沉淀最為普遍?！　∮?00g去核棗粉，加入250mL適當體積分數的乙醇，45℃水浴回流脫脂兩次，離心分離后棗渣加水共3500mL，90℃水浴攪拌浸提8h，離心分離，合并所得多糖提取液；提取液45℃減壓濃縮，濃縮液用無水乙醇沉淀，離心分離，得粗多糖沉淀；粗多糖加水溶解后，氯仿、正丁醇脫蛋白，用NaOH溶液調pH值至弱堿性，加0.4倍多糖液體積的H2O2，40℃水浴保溫4h脫色；脫色液對蒸餾水透

4、析24h，無水乙醇沉淀，離心分離，45℃真空干燥，得到大棗多糖。根據預實驗，選擇對水冷浸提取工藝有影響的主要因素：加水量、提取時間、提取次數及是否攪拌，按L9（34）進行正交試驗。按常規(guī)，將中藥的水冷浸條件設為中間水平，分別再取高低兩水平。最后得出枸杞多糖的最佳提取工藝為：取枸杞藥材，第一次加水l0倍，以后每次加水8倍量，共冷浸3次；每次冷浸1h；每小時攪拌10min.溶劑提取為常用的傳統(tǒng)方法之一，有自身的優(yōu)點。如不需特殊設備，成本低等，但此法往往提取效率低且費時，因此，近年來，伴隨著現代工業(yè)工程技術的迅猛發(fā)展，一些現代高新技術不斷被應用到植物多

5、糖的提取中。　　1.2酸提法　　有些多糖適合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。將熱水浸提過的阿魏側耳子實體殘渣加8倍量的3%的三氯乙酸浸提，15℃過夜，過濾，離心，將提取液用20%的NaOH中和至pH為7，濃縮、醇析沉淀、丙酮洗滌、真空冷凍干燥得酸提水溶性粗多糖PFA.從對海蒿子多糖的提取方法研究發(fā)現，從硫酸根含量及粗多糖產率看，酸提方法優(yōu)于水提方法?！　∑渚唧w酸提方法如下：取100g海蒿子干粉，加入1000ml0.1mol/LHCl溶液提取，室溫攪拌1h后過濾，重復操作三遍，合并濾液濾液減壓濃縮至總體積的1/5，再加入95%乙醇至乙醇濃度達3

6、0%，沉淀，離心除去沉淀中的褐藻酸。繼續(xù)向上清液中加入乙醇至乙醇濃度達70%，室溫放置過夜使沉淀完全，離心，沉淀干燥得海蒿子粗多糖C2.多次試驗算得平均產率為3.35%.在茜草多糖提取研究中，發(fā)現相對于水提，以稀酸提取茜草多糖，產品純度較高。具體方法如下：茜草根粗粉1000g，5%HC1浸泡，離心，取上清液加入EtOH并調節(jié)至濃度為70%，靜置，2500rpm離心，收集棕色沉淀物，95%EtOH洗滌3次，以4%HCl溶解，加1%活性炭脫色，真空抽濾，濾液過夜，棄去容器底部少許沉淀物，溶液置透析袋內，逆水法透析3日，冷凍干燥，得白色粉末約10g（多

7、糖A）。酸提法有其特殊性，只在一些特定的植物多糖提取中占有優(yōu)勢，報道的并不多。而且即使有優(yōu)勢，在操作上還應嚴格控制酸度，因為酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂?！　?.3堿提法　　與酸提類似，有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用稀堿提?。憾酁?.1mol/L氫氧化鈉、氫氧化鉀，為防止多糖降解，常通以氮氣或加入硼氫化鈉或硼氫化鉀。HayashiKatsuhiko發(fā)明了從綠色藻類中提取酸性多糖的方法，而種多糖用常規(guī)的熱水法是無法得到的。具體過程為：將干燥的綠藻粉末制成浮液，熱水浸泡提取或將含水綠藻直接用熱水提取

8、后離心分離，取黏稠的固狀物，加入堿水，在pH3.0的條件下再行攪拌提取，堿水提取液在攪拌的同時加入酸水調節(jié)pH值至3～4，靜置沉降后離心