多糖的提取分離工藝研究

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1、多糖的提取分離工藝研究多糖是由單糖連接而成的多聚物，人們對(duì)多糖的研究已經(jīng)有很長(zhǎng)時(shí)間的歷史，對(duì)多糖的初始研究可追溯到1936年Shear對(duì)多糖抗腫瘤活性的發(fā)現(xiàn)，至20世紀(jì)50年代，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些真菌多糖和高等植物多糖具有明顯的抑瘤活性。最近又發(fā)現(xiàn)許多中藥多糖還具有降血糖作用。70年代以來(lái)，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)多糖及糖復(fù)合物在生物體內(nèi)不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料，重要的是它存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中，參與生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)。多糖類物質(zhì)是所有生命有機(jī)體的重要組成部分，廣泛存在于動(dòng)物、植物、和微生物細(xì)胞壁中，是生物體內(nèi)除核酸和蛋白質(zhì)以外的又一類重要的生物分子?？?/p>

2、學(xué)研究已經(jīng)確認(rèn)糖類物質(zhì)具有許多生物活性，包括抗腫瘤、免疫、降血糖和抗病毒等，而且對(duì)機(jī)體幾乎無(wú)毒副作用。中藥多糖因具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤降血糖等藥理作用，而且?guī)缀鯖](méi)有毒性與副作用，因此引起國(guó)內(nèi)外藥理學(xué)家、生物學(xué)家和化學(xué)家們的關(guān)注?！　?.多糖的提取工藝　　1.1水提法　　用水作溶劑來(lái)提取多糖是最常用的方法之一，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提。水提取的多糖多數(shù)是中性多糖。一般植物多糖提取多數(shù)采用熱水浸提法，該法所得多糖提取液可直接或離心除去不溶物；或者利用多糖不溶于高濃度乙醇的性質(zhì)，用高濃度乙醇沉淀提純多糖；但由于不同性質(zhì)或不同相對(duì)分子質(zhì)

3、量的多糖沉淀所需乙醇濃度不同，它也可以用于樣品中不同多糖組分的分級(jí)分離；還可按多糖不同性質(zhì)在粗分階段利用混合溶劑提取法對(duì)植物中不同的多糖進(jìn)行分離；其中，以乙醇沉淀最為普遍?！　∮?00g去核棗粉，加入250mL適當(dāng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇，45℃水浴回流脫脂兩次，離心分離后棗渣加水共3500mL，90℃水浴攪拌浸提8h，離心分離，合并所得多糖提取液；提取液45℃減壓濃縮，濃縮液用無(wú)水乙醇沉淀，離心分離，得粗多糖沉淀；粗多糖加水溶解后，氯仿、正丁醇脫蛋白，用NaOH溶液調(diào)pH值至弱堿性，加0.4倍多糖液體積的H2O2，40℃水浴保溫4h脫色；脫色液對(duì)蒸餾水透

4、析24h，無(wú)水乙醇沉淀，離心分離，45℃真空干燥，得到大棗多糖。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇對(duì)水冷浸提取工藝有影響的主要因素：加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)及是否攪拌，按L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)。按常規(guī)，將中藥的水冷浸條件設(shè)為中間水平，分別再取高低兩水平。最后得出枸杞多糖的最佳提取工藝為：取枸杞藥材，第一次加水l0倍，以后每次加水8倍量，共冷浸3次；每次冷浸1h；每小時(shí)攪拌10min.溶劑提取為常用的傳統(tǒng)方法之一，有自身的優(yōu)點(diǎn)。如不需特殊設(shè)備，成本低等，但此法往往提取效率低且費(fèi)時(shí)，因此，近年來(lái)，伴隨著現(xiàn)代工業(yè)工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，一些現(xiàn)代高新技術(shù)不斷被應(yīng)用到植物多

5、糖的提取中?！　?.2酸提法　　有些多糖適合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。將熱水浸提過(guò)的阿魏側(cè)耳子實(shí)體殘?jiān)?倍量的3%的三氯乙酸浸提，15℃過(guò)夜，過(guò)濾，離心，將提取液用20%的NaOH中和至pH為7，濃縮、醇析沉淀、丙酮洗滌、真空冷凍干燥得酸提水溶性粗多糖PFA.從對(duì)海蒿子多糖的提取方法研究發(fā)現(xiàn)，從硫酸根含量及粗多糖產(chǎn)率看，酸提方法優(yōu)于水提方法?！　∑渚唧w酸提方法如下：取100g海蒿子干粉，加入1000ml0.1mol/LHCl溶液提取，室溫?cái)嚢?h后過(guò)濾，重復(fù)操作三遍，合并濾液濾液減壓濃縮至總體積的1/5，再加入95%乙醇至乙醇濃度達(dá)3

6、0%，沉淀，離心除去沉淀中的褐藻酸。繼續(xù)向上清液中加入乙醇至乙醇濃度達(dá)70%，室溫放置過(guò)夜使沉淀完全，離心，沉淀干燥得海蒿子粗多糖C2.多次試驗(yàn)算得平均產(chǎn)率為3.35%.在茜草多糖提取研究中，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于水提，以稀酸提取茜草多糖，產(chǎn)品純度較高。具體方法如下：茜草根粗粉1000g，5%HC1浸泡，離心，取上清液加入EtOH并調(diào)節(jié)至濃度為70%，靜置，2500rpm離心，收集棕色沉淀物，95%EtOH洗滌3次，以4%HCl溶解，加1%活性炭脫色，真空抽濾，濾液過(guò)夜，棄去容器底部少許沉淀物，溶液置透析袋內(nèi)，逆水法透析3日，冷凍干燥，得白色粉末約10g（多

7、糖A）。酸提法有其特殊性，只在一些特定的植物多糖提取中占有優(yōu)勢(shì)，報(bào)道的并不多。而且即使有優(yōu)勢(shì)，在操作上還應(yīng)嚴(yán)格控制酸度，因?yàn)樗嵝詶l件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂?！　?.3堿提法　　與酸提類似，有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用稀堿提?。憾酁?.1mol/L氫氧化鈉、氫氧化鉀，為防止多糖降解，常通以氮?dú)饣蚣尤肱饸浠c或硼氫化鉀。HayashiKatsuhiko發(fā)明了從綠色藻類中提取酸性多糖的方法，而種多糖用常規(guī)的熱水法是無(wú)法得到的。具體過(guò)程為：將干燥的綠藻粉末制成浮液，熱水浸泡提取或?qū)⒑G藻直接用熱水提取

8、后離心分離，取黏稠的固狀物，加入堿水，在pH3.0的條件下再行攪拌提取，堿水提取液在攪拌的同時(shí)加入酸水調(diào)節(jié)pH值至3～4，靜置沉降后離心