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1、貫葉金絲桃總黃酮提取工藝研究論文.freelizetheextractionprocessoftotalflavonoidsinHypericumperforatumL..MethodsTheconcentrationandvolumeofalcohol,extractiontimeandfrequencyaticallystudiedbythetotalflavonoidsasthemarker.ResultsThemoreeffectiveesamountof70%alcoholunderrefluxfor3timesan
2、d2hforeachtime.ConclusionThismethodobtainsmoreeffectiveponents.Itisstableandreliable.KeyperforatumL.；totalflavonoids；hyperoside；extractionprocess貫葉金絲桃為2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)新增的藥材品種,是藤黃科金絲桃屬植物貫葉金絲桃HypericumperforatumL.的干燥地上部分,具有舒肝解郁、清熱利濕、消腫止痛等功效,用于情志不暢、氣滯郁悶、關節(jié)腫痛、小便不利等
3、。有研究表明,貫葉金絲桃總黃酮具有保肝、抗乙肝病毒和利膽作用,且其中的金絲桃苷效果最好。我們在以往研究的基礎上,.freelperforatumL.購自亳州九方藥材公司,產地為四川古藺地區(qū),安徽中醫(yī)學院藥學院中藥教研室潘魯敏副教授鑒定為藤黃科金絲桃屬植物貫葉金絲桃的上枝葉。金絲桃苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號111521-200303)。乙醇購自合肥酒精廠,其他試劑均為分析純,重蒸餾水自制。2含量測定2.1金絲桃苷含量測定采用高效液相色譜法測定金絲桃苷的含量，計算金絲桃苷提取率。2.1.1對照品溶液的制備精密稱取干燥
4、至恒重的金絲桃苷對照品5.2mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,制成0.208mg/mL金絲桃苷對照品溶液。2.1.2供試品溶液的制備取貫葉金絲桃提取物約40mg,精密稱定,加甲醇溶解后濾過,定容至50mL量瓶中,制成供試品溶液。2.1.3標準曲線的繪制精密吸取金絲桃苷對照品溶液0.5、1、2、3、4mL,分別用甲醇定容至10mL,制得系列對照品溶液。分別進樣20μL,記錄峰面積值Y,以C為橫坐標,Y為縱坐標,得回歸方程：Y＝175233C＋9464.6,r＝0.9999,說明金絲桃苷在10.4～83.2μg/mL
5、范圍內具有良好的線性關系。2.1.4精密度試驗取同一份對照品溶液,濃度為20.8μg/mL,進樣20μL,重復6次,測定峰面積,結果RSD＝1.47%,說明精密度良好。2.1.5重復性試驗取同一批貫葉金絲桃藥材提取物6份,制備樣品溶液,分別進樣20μL,測得峰面積RSD＝1.36%,表明該法重復性較好。2.1.6穩(wěn)定性試驗取供試品溶液,分別在0、2、4、6、8h進樣20μL,測定峰面積,RSD＝1.24%,結果表明在8h內樣品溶液穩(wěn)定性較好。2.1.7加樣回收率試驗精密稱取已知金絲桃苷含量的貫葉金絲桃提取物40mg,精密加入金
6、絲桃苷對照品(0.235mg/mL)5mL,依法制備供試品溶液。分別進樣20μL測定峰面積,計算回收率,結果見表1。表1金絲桃苷加樣回收率試驗結果（略）2.1.8樣品含量測定按供試品溶液制備方法制備樣品溶液,精密吸取20μL,注入高效液相色譜儀,測定金絲桃苷含量,見圖1,計算金絲桃苷的提取率。2.2總黃酮含量測定采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法測定貫葉金絲桃總黃酮含量,計算總黃酮提取率。2.2.1測定波長的選擇取金絲桃苷對照品、供試品溶液,比色后,進行紫外光譜掃描,其在510nm附近有最大吸收峰,因此,選擇51
7、0nm作為檢測波長。2.2.2測定方法精密吸取甲醇、蘆丁對照品溶液和供試品溶液1.0mL,分別置于25mL量瓶中,各加蒸餾水5mL,搖勻；加5%NaNO2溶液1.0mL,搖勻,放置6min；加10%Al(NO3)3溶液1.0mL,搖勻,放置6min；加4%NaOH溶液10mL,搖勻,用甲醇定容至25mL,放置15min,在510nm波長處測定吸收度,計算貫葉金絲桃總黃酮的含量。2.2.3供試品溶液的制備稱取貫葉金絲桃粉末2.0g,準確加入甲醇50.0mL,超聲40min,過濾,蒸干,即得供試品溶液。2.2.4穩(wěn)定性試驗取樣品溶
8、液,分別在0、1、2、3、4h取樣1.0mL,計算樣品中貫葉金絲桃總黃酮含量,結果樣品在4h內穩(wěn)定,RSD＝1.88%。2.2.5重復性試驗取貫葉金絲桃粉末2.0g(共6份),按供試品制備方法及測定方法分別制備和測定,計算貫葉金絲桃總黃酮含量,結果RSD＝1.96%。2.2.
