NYT537-2002豬放線桿菌胸膜肺炎診斷技術(shù).pdf

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1、11.220器1中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY1T537-2002豬放線桿菌胸膜肺炎診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforactinobaclluspleuropneumoma2002一08一27發(fā)布2002一12一01實(shí)施中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布303xY/T537-2002前言豬放線桿菌胸膜肺炎(簡(jiǎn)稱(chēng)APP)又稱(chēng)豬接觸性傳染性胸膜肺炎(porcinecontagiouspleuropneu-monia),是豬的一種呼吸系統(tǒng)重要傳染病。世界各國(guó)均有發(fā)生。本病主要引起豬的一種伴有胸膜炎的出血性壞死性肺炎，多呈最急性或急性病程而迅

2、速致死，可發(fā)生于任何年齡的豬只。尤其在集約化養(yǎng)豬場(chǎng)一旦發(fā)生會(huì)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)外用于本病的血清學(xué)診斷方法有凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散、間接血凝、補(bǔ)體結(jié)合(CF)以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。而最常應(yīng)用的血清學(xué)診斷方法是CF和ELISA試驗(yàn)。細(xì)菌的鑒定除用常規(guī)方法外，也有用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法診斷。型的鑒定常規(guī)方法有瓊脂擴(kuò)散和間接血凝等試驗(yàn)方法，近來(lái)亦有應(yīng)用核糖核酸分型的試驗(yàn)報(bào)道。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A,附錄B、附錄C、附錄D、附錄E,附錄F、附錄G,附錄H均為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本

3、標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:朱士盛、杜文金、徐瑞、王新。NY/T537-2002豬放線桿菌胸膜肺炎診斷技術(shù)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬放線桿菌胸膜肺炎的診斷技術(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)用于篩選試驗(yàn)，包括產(chǎn)地檢疫、流行病學(xué)調(diào)查和無(wú)本病健康豬群的建立補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)適用于口岸進(jìn)口豬檢疫。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn).然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本

4、適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB4789.28-1994食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑3病原學(xué)檢查3.1材料準(zhǔn)備3.1.1培養(yǎng)蒼3.1.1.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂:按GB4789.28-1994中4.7規(guī)定配制。3.1.1.2血瓊脂:按GB4789.28-1994中4.6規(guī)定配制，其中4.6.1成分用4.7.1成分代替。3.1.1.3尿素瓊脂:按GB4789.28-1994中3.15規(guī)定配制。3.1.1.4巧克力瓊脂:制備方法見(jiàn)附錄A,3.1.1.5類(lèi)胸膜肺炎微生物(PPLO)瓊脂:制備方法見(jiàn)附錄A,3.1.2其他材料3.1.2.1滅菌棉拭子。3.1.2.2革

5、蘭氏染色液:按GB4789.28-1994中2.2規(guī)定制備和染色。3.1.2.3糖發(fā)醉管:按GB4789.28-1994中3.2規(guī)定制備，3.2.1成分中蛋白陳改為多聚蛋白陳,pH調(diào)至7.2，另外，按0.5%加人糖的同時(shí)，按0.01%加人輔酶A后，分裝于有倒置小管的試管內(nèi)，68.94kPa(1150C蒸汽)滅菌15min,3.1.2.4雞表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌。3.2病料采集3.2.1活體病料采集:用棉拭子伸人鼻腔采集分泌物，放人無(wú)菌試管中立即送往實(shí)驗(yàn)室供分離。3.2.2死后病料采集:無(wú)菌采集具有典型病變的肺氣管、肺門(mén)淋巴結(jié)、鼻腔分泌物，

6、在最急性感染死亡的小豬，除采集上述病料外，還可取肝、脾病料。3.2.3樣品運(yùn)送:采集的樣品，應(yīng)在4'C條件下24h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。3.3病原分離將樣品按常規(guī)分離要求直接接種到血瓊脂(見(jiàn)3.1.1.2)表面，再用雞表皮葡萄球菌作交叉劃線，于37'C含500^'10%二氧化碳(COQ)下培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)用巧克力瓊脂(見(jiàn)第A.1章)和PPLO瓊脂(見(jiàn)第A.2章)。NY/T537一20023.4病原鑒定3.4.1培養(yǎng)形態(tài)及染色特性3.4.1.1于血瓊脂平板培養(yǎng)24h--48h,胸膜肺炎放線桿菌(APP)為露珠樣的小菌落,ft徑1nom-2mm,3.4.1.

7、2多數(shù)菌株產(chǎn)生R溶血帶，靠近雞表皮葡萄球菌菌苔的菌落較大，隨著與葡萄球菌生長(zhǎng)線的距離增加而變小或不生長(zhǎng)，即所謂“衛(wèi)星現(xiàn)象”。3.4.1.3取典型菌落作革蘭氏染色，應(yīng)為革蘭氏陰性小球桿菌，兩極著色繼代培養(yǎng)中呈明顯多形態(tài)幼齡培養(yǎng)物中偶有成絲狀。3.4.1.4被分離菌具有以下特點(diǎn)即可初步判定為豬胸膜肺炎放線桿菌:a)染色鏡檢為革蘭氏陰性桿菌或多形態(tài);b)在血瓊脂培養(yǎng)基仁生長(zhǎng)具有溶血現(xiàn)象;。)生長(zhǎng)培養(yǎng)需要v因子，即具有“衛(wèi)星現(xiàn)象”3.4.2生化特性3.4.2.1v因子需要測(cè)定:按3.3接種和3.4.1觀察。有“衛(wèi)星現(xiàn)象”為需要v因子。3.4.2.2尿素

8、酶試驗(yàn):將分離菌接種于尿素瓊脂(見(jiàn)3.1.1.3)斜面上，于37-C溫箱中培養(yǎng)3h-v12h,斜面變粉紅色者為尿素酶試驗(yàn)陽(yáng)性。3.4.2.3溶血性:將