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《tgfβ1誘導肺泡上皮細胞間質轉化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、TGF-β1誘導肺泡上皮細胞間質轉化作者：黃振杰,鄭金旭,莫凱天,蘇石芳作者單位：廣西北海市人民醫(yī)院呼吸科;江蘇大學附屬醫(yī)院呼吸科;上海市第八人民醫(yī)院消化科【摘要】目的：通過觀察TGF-1誘導下A549細胞出現的細胞形態(tài)學和E-cad表達的變化，探討上皮細胞-間質細胞轉化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)過程在肺纖維化發(fā)病機制中的作用。方法：體外培養(yǎng)A549細胞，以TGF-1進行干預，收集不同時段的細胞，應用熒光實時定量PCR(RT-PCR)檢測TGF-1干預前后E-cad的mRNA表
2、達變化;倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學的變化;間接免疫熒光觀察E-cad蛋白表達的變化。結果：倒置相差顯微鏡觀察到TGF-1干預后A549細胞由鵝卵石狀變?yōu)樗笮?，形態(tài)如同肌纖維母細胞。間接免疫熒光顯示A549細胞的E-cad表達(紅色熒光染色)隨時間延長逐漸減少。RT-PCR顯示E-cad的mRNA表達下調(P0.05)。結論：TGF-1在體外誘導肺泡上皮細胞向間質細胞轉化,肺泡上皮細胞間質轉化是肺纖維化的重要發(fā)病機制之一?！娟P鍵詞】轉化生長因子1,A549細胞,上皮細胞間質轉化,肺纖維化Abstract：ObjectiveBy
3、observingthecellularmorphologychangesandtheexpressionofE-cadafterA549cellsweretreatedwithtransforminggrowthfactor1(TGF-1)，toinvestigatetheroleofepithelial-mesenchymaltransition(EMT)inthepathogenesyofpulmonaryfibrosis.MethodA549cellsculturedinvitroweretreatedbyTGF-1,
4、thenharvestedatdifferenttimepointstoassaymRNAexpressionofE-cadbyreal-timePCR(RT-PCR)beforeandafterA549cellsbeingtreatedbyTGF-1.Cellularmorphologychangeswereobservedbyphase-contrastmicroscope.ProteinexpressionofE-cadbyindirectimmunofluorescence.ResultsAfterbeingtreat
5、edbyTGF-1，A549cellswereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopetoturnfrompebbleshapetofusiformshape，amyofibroblast-likemorphology.IndirectimmunofluorescenceshowedproteinexpressionofE-cadreducedastimewentby(redstain).ThemRNAexpressionofE-cadwasdown-regulatedinRT-PCR
6、(P0.05).ConclusionTGF-1inducedEMTofalveolarepithelialcellsinvitrosuggeststhatEMTofalveolarepithelialcellsmightbeoneoffundamentalmechanismsofpulmonaryfibrosis.KeyWords:TransforminggrowthfactorA549cells;Epithelial-mesenchymaltransition;Pulmonaryfibrosis特發(fā)性肺纖維化(IPF)是最常
7、見的肺間質疾病,也是肺間質纖維化的主要原因。多數肺間質疾病病因不明,其發(fā)病機制目前也未完全闡明。傳統(tǒng)觀點認為各種損傷因素損傷肺泡上皮細胞和毛細血管內皮細胞，炎癥細胞浸潤，細胞因子失衡，肺實質損傷后繼發(fā)肺間質細胞增殖過度修復導致纖維化。國外有文獻報道IPF是一種涉及異常創(chuàng)傷愈合的功能紊亂，進行性的上皮損傷和(或)激活可能處于纖維形成和間質細胞增殖的核心位置，這種作用是不依賴于炎癥的[1-2]。肺泡上皮細胞(AECs)不僅僅是作為發(fā)病的促動因素，它們本身就可以通過一個叫做上皮細胞-間質轉化(epithelial-mesenchym
8、altransition，EMT)的過程獲得間質細胞表型而作為成纖維細胞和肌纖維母細胞的重要來源。在這個新的模式中，肺泡上皮應該被看作纖維化的關鍵環(huán)節(jié)之一，它作為一個多能的干細胞具有相當的可塑性，能參與到交替的途徑中：上皮再生修復正常的肺泡結構，凋亡，或者通過EMT形成纖維化
