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1、TGF-β1誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化作者：黃振杰,鄭金旭,莫?jiǎng)P天,蘇石芳作者單位：廣西北海市人民醫(yī)院呼吸科;江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸科;上海市第八人民醫(yī)院消化科【摘要】目的：通過觀察TGF-1誘導(dǎo)下A549細(xì)胞出現(xiàn)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和E-cad表達(dá)的變化，探討上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)過程在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用。方法：體外培養(yǎng)A549細(xì)胞，以TGF-1進(jìn)行干預(yù)，收集不同時(shí)段的細(xì)胞，應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)TGF-1干預(yù)前后E-cad的mRNA表
2、達(dá)變化;倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;間接免疫熒光觀察E-cad蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果：倒置相差顯微鏡觀察到TGF-1干預(yù)后A549細(xì)胞由鵝卵石狀變?yōu)樗笮?，形態(tài)如同肌纖維母細(xì)胞。間接免疫熒光顯示A549細(xì)胞的E-cad表達(dá)(紅色熒光染色)隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減少。RT-PCR顯示E-cad的mRNA表達(dá)下調(diào)(P0.05)。結(jié)論：TGF-1在體外誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化是肺纖維化的重要發(fā)病機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1,A549細(xì)胞,上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化,肺纖維化Abstract：ObjectiveBy
3、observingthecellularmorphologychangesandtheexpressionofE-cadafterA549cellsweretreatedwithtransforminggrowthfactor1(TGF-1)，toinvestigatetheroleofepithelial-mesenchymaltransition(EMT)inthepathogenesyofpulmonaryfibrosis.MethodA549cellsculturedinvitroweretreatedbyTGF-1,
4、thenharvestedatdifferenttimepointstoassaymRNAexpressionofE-cadbyreal-timePCR(RT-PCR)beforeandafterA549cellsbeingtreatedbyTGF-1.Cellularmorphologychangeswereobservedbyphase-contrastmicroscope.ProteinexpressionofE-cadbyindirectimmunofluorescence.ResultsAfterbeingtreat
5、edbyTGF-1，A549cellswereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopetoturnfrompebbleshapetofusiformshape，amyofibroblast-likemorphology.IndirectimmunofluorescenceshowedproteinexpressionofE-cadreducedastimewentby(redstain).ThemRNAexpressionofE-cadwasdown-regulatedinRT-PCR
6、(P0.05).ConclusionTGF-1inducedEMTofalveolarepithelialcellsinvitrosuggeststhatEMTofalveolarepithelialcellsmightbeoneoffundamentalmechanismsofpulmonaryfibrosis.KeyWords:TransforminggrowthfactorA549cells;Epithelial-mesenchymaltransition;Pulmonaryfibrosis特發(fā)性肺纖維化(IPF)是最常
7、見的肺間質(zhì)疾病,也是肺間質(zhì)纖維化的主要原因。多數(shù)肺間質(zhì)疾病病因不明,其發(fā)病機(jī)制目前也未完全闡明。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為各種損傷因素?fù)p傷肺泡上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞因子失衡，肺實(shí)質(zhì)損傷后繼發(fā)肺間質(zhì)細(xì)胞增殖過度修復(fù)導(dǎo)致纖維化。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道IPF是一種涉及異常創(chuàng)傷愈合的功能紊亂，進(jìn)行性的上皮損傷和(或)激活可能處于纖維形成和間質(zhì)細(xì)胞增殖的核心位置，這種作用是不依賴于炎癥的[1-2]。肺泡上皮細(xì)胞(AECs)不僅僅是作為發(fā)病的促動(dòng)因素，它們本身就可以通過一個(gè)叫做上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchym
8、altransition，EMT)的過程獲得間質(zhì)細(xì)胞表型而作為成纖維細(xì)胞和肌纖維母細(xì)胞的重要來源。在這個(gè)新的模式中，肺泡上皮應(yīng)該被看作纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，它作為一個(gè)多能的干細(xì)胞具有相當(dāng)?shù)目伤苄?，能參與到交替的途徑中：上皮再生修復(fù)正常的肺泡結(jié)構(gòu)，凋亡，或者通過EMT形成纖維化
