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1、反相高效液相色譜法測(cè)定半枝蓮中原兒茶酸的含量【摘要】目的建立半枝蓮藥材中原兒茶酸的含量測(cè)定方法。方法樣品用30％的乙醇回流提取，提取液濾過(guò)，以反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測(cè)定。用DiamonsilTMC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-0.05％磷酸為流動(dòng)相，流速為1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為258nm。結(jié)果原兒茶酸的保留時(shí)間約為7min，且與其它峰的分離度大于1.5。原兒茶酸的線性范圍為0.018～0.184μg（r=0.9998），最低檢測(cè)限為3ng，平均回收率和RSD分別為99.7%和0.27%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可為半枝蓮藥材的質(zhì)
2、量評(píng)價(jià)提供有效手段?！娟P(guān)鍵詞】反相高效液相色譜法半枝蓮原兒茶酸含量測(cè)定 RP-HPLCDeterminationofProtocatechuicAcidinScutellariabarbara Abstract:ObjectiveToestablishamethodtodeterminethecontentofprotocatechuicacidinScutellariabarbara.MethodsThesampleinationofprotocatechuicacidinScutellariabarbata.ThechromatographicprocedureonsilTMC1
3、8asananalyticcolumnandamixtureof25volumeofmethanol,75volumeof0.05%phosphoricacidasamobilephaseataflol·min-1.Thedetection.ResultsThepeakofprotocatechuicacidappearedforabout7minutes.Resolutionofprotocatechuicacidorethan1.5anditslinearrangeinimumlimitofdetectionethodissensitiveandquickandcanbeusedfo
4、rthequalitycontrolofScutellariabarbara. KeypoonsilTMC18分析柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05%磷酸；流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：258nm；進(jìn)樣量均為20μl；靈敏度：2.0AUFS。在以上色譜條件下，樣品中原兒茶酸與其它組分的色譜峰分離度良好。見(jiàn)圖1。 2.2供試品溶液的制備取本品粉末（過(guò)60目篩）約2g，精密稱定，置50ml圓底燒瓶中，精密加入30%乙醇25ml，稱定重量，回流1h。放冷，稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)充減失的量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，即得?！ ?.3對(duì)照品貯備液
5、的制備精密稱取原兒茶酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.092mg的溶液，即得?！ ?.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍分別精密量取原兒茶酸對(duì)照品貯備液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.0ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得不同濃度的對(duì)照品溶液。分別吸取20μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（×107）Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得回歸方程為：Y＝4.0946X－0.0014，r＝0.9998（n＝6）。原兒茶酸在0.018～0.184μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?！ ?.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)分別于0，2，4，6，8，24h精密吸取
6、供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。供試品溶液于24h內(nèi)，色譜峰面積無(wú)明顯變化，RSD為0.63%。結(jié)果表明在24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定?！ ?.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。原兒茶酸峰面積的RSD為0.41%，表明該法的精密度良好?！ ?.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批半枝蓮藥材粉末（過(guò)60目篩）約2g，共6份，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量，其RSD為0.86%，表明該法重現(xiàn)性良好?！ ?.8最低檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)取上述對(duì)照品貯備液，逐步稀釋，進(jìn)樣，直至信噪比S/N≥3，此時(shí)進(jìn)樣量即為最低檢測(cè)限。原兒茶酸
7、的最低檢測(cè)限為3ng?！ ?.9回收率實(shí)驗(yàn)取已知原兒茶酸含量為59.61μg·g-1的半枝蓮藥材粉末（過(guò)60目篩）約1g，共6份，精密稱定。分別精密量取上述原兒茶酸對(duì)照品儲(chǔ)備液0.7ml，加入上述6份藥材中，按“2.2”項(xiàng)下方法操作制備供試品溶液。測(cè)定其平均回收率為99.7%，RSD為0.27%?？梢?jiàn)本方法的準(zhǔn)確度高，精密度好，方法可行?！ ?.10樣品測(cè)定取24批半枝蓮藥材粉末（過(guò)60目篩）約2g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下制備供
