磁性免疫層析技術(shù)在氯霉素殘留快速檢測中的應用分析論文

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1、AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceDevelopmentofMagneticLateralFlowImmunoassaysforRapidDetectionofChloramphenicolResiduesCandidate:HuangWeiMajor:PharmaceuticalEngineeringSupervisor:Dr.YangHaiHuazhongUniversityofScienc

2、e&TechnologyWuhan430074，P.R.ChinaMay2012獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和

3、電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于 不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日華中科技大學碩士學位論文摘要在食品安全事故頻發(fā)的今天，食品安全問題更加受到人們的關(guān)注，同時也對食品安全檢測技術(shù)提出了更高的要求。氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作為一種廣譜抗生素，因其價廉高效，曾作為藥物應用于人和

4、動物細菌性疾病的治療，并作為飼料添加劑廣泛應用于畜牧業(yè)、水產(chǎn)業(yè)?，F(xiàn)已證明，氯霉素對機體有很大的毒副作用，因此世界上許多國家明令禁止將此藥用于可食用性動物。歐盟對氯霉素的檢測限由原來的10μg/kg降至0.1μg/kg，比原標準要求提高了100倍；美國FDA規(guī)定的檢出限也由原來的5μg/kg降為了0.3μg/kg。為了嚴格監(jiān)控氯霉素的使用，抑制氯霉素引起的食品安全問題的發(fā)生，建立高效、靈敏、經(jīng)濟的氯霉素殘留分析方法很有必要。磁性免疫層析法（magneticlateralflowimmunoassays，MLFIAs）作為快速

5、檢測方法的新秀，以超順磁性微球代替?zhèn)鹘y(tǒng)的膠體金作為信號標記物，即可以通過肉眼觀察或光學比色法實現(xiàn)快速定性分析，又可以進一步利用超順磁材料特殊的磁信號實現(xiàn)免疫層析技術(shù)的定量化檢測。本論文考查了幾種不同來源的超順磁性納米微球，篩選了適用于免疫層析分析的磁球，研究優(yōu)化了磁性免疫層析條件，建立了一種將免疫磁分離與免疫磁層析相結(jié)合的磁性免疫層析快速檢測新方法，并將其用于氯霉素殘留的快速檢測。主要研究內(nèi)容包括：1)篩選出適合進行磁性免疫層析的磁性納米粒：主要對8種不同來源超順磁性微球的性能進行了對比，選擇出了適合進行磁性免疫層析的磁球

6、A和磁球D。2)優(yōu)化了磁微粒免疫層析條件：比較了磁球A和磁球D在不同鹽濃度和pH下的性能差異。研究了不同上樣緩沖液配方對磁球展層的影響，發(fā)現(xiàn)表面活性劑和高濃度蛋白對于磁球的展層具有明顯促進作用，磁球A在0.05%以上的Tween20中就可以完全展層，在5%以上的BSA中就可以部分展層，后使用含5%BSA和1%Tween20的0.01MPBS作為上樣緩沖液。研究了干I華中科技大學碩士學位論文燥對磁球展層的影響，發(fā)現(xiàn)干燥后的磁球更趨向于團聚。由于磁球D同小鼠IgG的偶聯(lián)物，會發(fā)生團聚而影響展層，故最終選用磁球A開展氯霉素殘留檢

7、測方法研究。3)建立了氯霉素殘留的磁性免疫層析檢測新方法：從磁球與抗氯霉素單抗的偶聯(lián)條件，T點、C點的包被條件，及免疫磁分離技術(shù)用于樣品處理等條件，對氯霉素的檢測進行了優(yōu)化。選擇CB作為包被緩沖液，C點的GAM最佳包被濃度為1:100倍稀釋，T點為1:5倍稀釋。磁球：mAbCAP最佳偶聯(lián)比為100:1。100:1的偶聯(lián)比與25:1的比較，CAP檢測限由10ng/mL降低到了4ng/mL以下。建立了使用磁分離的方法處理大體積樣品的方法。本研究建立了一種將免疫磁分離與免疫磁層析相結(jié)合的磁性免疫層析快速檢測新方法，使用氯霉素作為

8、檢測對象，并與本課題組自制的光學成像分析儀相結(jié)合，實現(xiàn)氯霉素殘留的快速半定量檢測。這些研究工作也將為今后發(fā)展免疫層析磁顆粒的磁信號定量檢測奠定基礎。關(guān)鍵詞：磁性納米粒；免疫層析；氯霉素；快速檢測；食品安全II華中科技大學碩士學位論文AbstractAlongwiththefrequentfoodsafe