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1、1?琥珀酸脫氫酶作用及競爭抑制的觀察2?紫外分光法測定核酸含量本實驗分組為15組，如果為16組，相應材料要增加。需要的試劑配制方法注意事項1.5%琥珀酸鈉溶液7.5g琥珀酸鈉一500ml-15小瓶沒冇琥珀酸鈉則用琥珀酸代替后用NaOH調(diào)和至PH7.01%丙二酸鈉5g內(nèi)二酸鈉一500ml-15小瓶沒有丙二酸鈉則用丙二酸代替后用NaOH調(diào)和至PH7.00.02%甲稀藍O.lg甲稀藍-*500ml-*15小瓶（棕色瓶）甲稀藍別名亞甲酰藍l/15mol/LNa2HPO423.6gNa2HPO4-2000m
2、l-15大瓶石蠟油可以不用分裝每個房間在水浴鍋前放1個核酸稱一淀量的小牛胸腺DNA融入0.1%的NaOH5-50ug/mL濃度羊的心臟切碎成小塊大約2g左右提前購買，將皮、脂肪處理掉分割后放在冰箱里石英砂均勻的撒在上面注：每三個人一組，分為15紐。如果人數(shù)多可以適當多分幾瓶試劑。所需儀器所需數(shù)量40ml試劑瓶4560ml試劑瓶15試管①4x1502x15共90個移液管（優(yōu)先10ml的本次用5ml移液管）15研缽15膠頭滴管共力個種類數(shù)量心臟提取液151.5%琥珀酸鈉151%丙二酸鈉150.02%甲
3、稀藍15蒸餡水15液體石蠟2紫外吸收法測定核酸含量一、實驗H的：1.掌握紫外吸收法測定核酸含量的原理2.掌握利用紫外線分光度計測定核酸含量二、實驗原理：DNA和RNA都冇吸收紫外線的性質(zhì)，授大吸收峰在260nm波長處紫外線吸收是喋吟、II密喘堿基貝?有共軌雙健系統(tǒng)(一C=C—C=C一)，能夠強烈吸收250^280nm波長的紫外光。等書上112頁三、實驗試劑與器材DNA樣品紫外分光光度計四、實驗步驟1?取DNA樣品5m1,于紫外分光光度計上測定260nm與280nm處的0D值按下式按下式計算核酸濃度
4、①計算核酸濃度DNA的質(zhì)量濃度(mg/l)=0D260nm/0.020xLx稀釋倍數(shù)②計算核酸純度=0D260nm/0D280nm2.取DNA樣品5ml，沸水浴中加熱5min于紫外分光光度計上，測260nm處的0D值比較DNA前后吸光度0D的差異。五、實驗結(jié)果與分析備注：紫外光區(qū)：100400nm可見光區(qū)：400-700nm紅外光區(qū)：700500um比色杯：玻璃比色杯(glass,G)：僅用于可見光區(qū)石英比色杯(silici,S)：用于可見、紫外光區(qū)。比色杯清洗：不能丿IJ堿性試劑洗滌，川弱酸性試
5、劑洗滌，或者去污劑洗滌。琥珀酸脫氫酶的作用及競爭性抑制的觀察一、實驗目的掌握酶的競爭性抑制作用的原理及測控方法二實驗原理琥珀酸脫氫酶是三竣酸循環(huán)中的一個重要的酶,測定細胞中有無這種酶可以初步鑒定三竣酸循環(huán)途徑是否存在。琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫，產(chǎn)生的氫可通過一系列傳遞體最后遞給氧而生成水。在缺氧的情況下,若有適當?shù)氖軞潴w也可顯示出脫氫酶的作用。如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下之氫可將藍色的甲烯藍還原成無色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作甩琥珀酸-甲
6、烯藍琥珀酸脫氫酶延胡索酸-甲烯白無氧條件~k丙二酸的化學結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似尼能與琥珀酸競爭而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結(jié)合,則不能再催化琥珀酸脫氫,這種現(xiàn)象稱為競爭性抑制。如相對地增加琥珀酸的濃度,則可減輕丙二酸的抑制作用。（參考上屆實驗報告寫公式）實驗試劑與器材羊心臟、1.5%琥珀酸鈉溶液、1%丙二酸鈉溶液、0.02%甲烯藍溶液、l/15mol/LNa2HPO4溶液、液體石蠟。實驗步驟L稱取新鮮羊4L'1.5g放研缽中，加入等體積的石英砂及l(fā)/15mol/LNa2HPO4溶液2m
7、l,搗碎成漿，再加入4mll/15mol/LNa2HPO4溶液，放置30分鐘f不時搖動，于2000r/min離心取上清液備用。單位：滴試管號心臟提取液1?5%琥珀酸鈉1%丙一酸鈉蒸憎水0.02%甲稀藍155—25225525235205524555202注：充分搖勻，加l-1.5cm高的石蠟。37。（：水浴觀察顏色變化3將第一只試管用力搖動觀察有無變化。五、注意事項要充分搖勻，覆蓋石蠟油后，觀察時切勿搖動。六、實驗結(jié)果與分析
