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《cpg基序甲基化狀態(tài)及其調(diào)控因素在sle發(fā)病機(jī)制中的作用分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、優(yōu)秀畢業(yè)論文復(fù)旦大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文中文摘要第一部分SLE患者與正常人cpG基序甲基化狀態(tài)與DNMT的表達(dá)目的研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者(SLE)CpG基序甲基化狀態(tài)和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的mRNA表達(dá)水平，并探討兩者的關(guān)系。方法分離38例SLE患者與19例正常人外周血淋巴細(xì)胞，分別用5一甲基胞嚓陡抗體與流式細(xì)胞儀檢測(cè)CPG基序甲基化水平和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PcR)分析DNMTI、DNMT3A、DNMT3B的m胭A表達(dá)水平。結(jié)果活動(dòng)期SLE患者的CpG基序甲基化水平(8.08士1.70)低于正常對(duì)照組(11.61土1.20，P<
2、0.01)與緩解期SLE患者(10.9社1.46，P<0.05)，正常人與緩解期SLE患者的CpG基序甲基化水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。SLE患者的CpG基序甲基化水平與SLE一DAI成負(fù)相關(guān)(r=一0.79，P<0.05)?；顒?dòng)期SLE患者(0.421士0.178)與緩解期SLE患者(0.516士0.162)的DNMTI表達(dá)水平均低于正常對(duì)照組(0.781士0.192，P<0.05)?；顒?dòng)期、緩解期SLE患者DNMTI的表達(dá)水平相比，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?；顒?dòng)期(0.698士0.183)、緩解期(0.760士0.1
3、75)SLE患者及正常人(0.724士0.158)的DNMT3A表達(dá)水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DNMT3B的表達(dá)水平極低?；顒?dòng)期與緩解期SLE患者DNMTI的表達(dá)水平與SLE一DAI的相關(guān)性不明顯(r=一0.23，P>0.05)。SLE患者CpG基序甲基化水平與DNMTI的表達(dá)水平相關(guān)性不明顯(r=0.28，P>0.05)。結(jié)論SLE患者CpG基序甲基化水平的下降在SLE發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。DNMTI表達(dá)水平的下降在SLE發(fā)病機(jī)制中可能起重要作用，但不是決定SLE患者CpG基序甲基化狀態(tài)的惟一因素。關(guān)鍵詞紅斑狼瘡，系統(tǒng)性;
4、CpG基序甲基化;DNA甲基轉(zhuǎn)移酶;表觀遺傳學(xué)中圖分類號(hào):R75第二部分內(nèi)外因素對(duì)CpG基序甲基化狀態(tài)與DNMTI表達(dá)的影響目的探討5一氮雜胞普、雌二醇及紫外線(254nm)對(duì)SLE患者與正常人cpG基序甲基化狀態(tài)與DNMTI表達(dá)的影響。方法分離12例SLE患者與11例正常人外周血淋巴細(xì)胞，經(jīng)PHA刺激1天后，分為未處理組、5一氮雜胞昔組、雌二醇組、紫外線組，繼續(xù)培養(yǎng)3天后分別用5一甲基胞嚓陡抗體與流式細(xì)胞儀檢測(cè)CpG基序甲基化水平和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(realtimeRl斗PCR)分析DNMTI的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果與非處理組相比
5、，5一氮雜胞營(yíng)組SLE患者與正常人的CpG基序甲基化水平均下降(p<0.1)，DNMTI表達(dá)水平的下降無統(tǒng)計(jì)力精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文復(fù)旦大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文學(xué)意義(p>0.05);雌二醇組、紫外線組SLE患者與正常人的CpG基序甲基化水平與DNMTI的mRNA表達(dá)水平的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。結(jié)論5一氮雜胞普可抑制CpG基序甲基化狀態(tài)，其抑制作用的產(chǎn)生與DNMTI表達(dá)水平的下降無明顯相關(guān)性。雌二醇與紫外線(254nm)對(duì)CpG基序甲基化狀態(tài)與DNMTI的表達(dá)水平的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。關(guān)鍵詞紅斑狼瘡，系統(tǒng)性;CpG基序甲基化;D
6、NA甲基轉(zhuǎn)移酶;5一氮雜胞營(yíng);雌二醇;紫外線中圖分類號(hào):R75第三部分甲基cpG結(jié)合域蛋白的構(gòu)建、表達(dá)、鑒定目的在大腸桿菌中表達(dá)甲基CpG結(jié)合域四聚體蛋白，并對(duì)其進(jìn)行純化和鑒定。方法將重組表達(dá)質(zhì)粒4xMBD一pET30b+轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a克隆擴(kuò)增并測(cè)序鑒定后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后接種于LB培養(yǎng)基中，異丙基硫代半乳糖昔(IPTG)誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni一TA親和純化，通過SDS一PAGE和Westemblotting鑒定蛋白表達(dá)。結(jié)果克隆質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與理論預(yù)期完全一致，SDS一PAGE顯示在大腸桿菌中表達(dá)出分子量為46
7、000的目標(biāo)蛋白，磯范Stemblotting顯示目標(biāo)蛋白帶有His融合標(biāo)簽(氨基端)和HA標(biāo)簽(梭基端)。結(jié)論成功表達(dá)、純化了甲基CpG結(jié)合域四聚體蛋白，為今后進(jìn)一步研究DNA甲基化及其調(diào)控因素奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞CpG基序甲基化;甲基CpG結(jié)合域;原核表達(dá);蛋白純化中圖分類號(hào):R75精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文復(fù)旦大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文Abstr8CtPart1MethylationofCPGmotifsandexPressionofDNAMethyltransferaseinthePatientswithsystemieluPuseryth
8、ematosusandnormaleontrolsObjeetiveTostudymet勿lationofCPGmotifsandexPression
