sds_page分離膠_濃縮膠配方

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1、WORD格式整理SDS-PAGE1、SDS-PAGE:聚丙烯酰胺凝膠電泳2、Acr:丙烯酰胺;配膠時用30%Acr(質(zhì)量比Acr:Bis=29:1)3、Bis:甲叉雙丙烯酰胺4、DDW:超輕水5、SDS:十二烷基硫酸/磺酸鈉,陰離子去污劑(配膠時用10%)6、APS:過硫酸銨NH4S2O4配膠時用10%7、TEMED:四甲基乙二胺,促凝劑8、Tris-Hcl:3羥基氨基甲烷鹽酸緩沖液,配膠時(分離膠ph=8.8,濃縮膠ph=6.8)9、DTT:二硫蘇糖醇,DTT也常常被用于蛋白質(zhì)中二硫鍵的還原,可用于阻止蛋白質(zhì)中

2、的半胱氨酸之間所形成的蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間二硫鍵。10、IMA:碘乙酰胺,碘代乙酰胺用于有機合成,在蛋白組學中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測序以及酶抑制劑等,蛋白組學級試劑。 CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一樣,可通過下列反應不可逆地抑制SH酶類的物質(zhì)。專業(yè)資料值得擁有WORD格式整理1)根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠):SDS-PAGE分離膠濃度最佳分離范圍6%膠50-150kD8%膠30-90kD10%膠20-80kD12%膠1

3、2-60kD15%膠10-40kD專業(yè)資料值得擁有WORD格式整理成分配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)6%膠51015203050蒸餾水2.04.06.08.012.020.030%Acr-Bis(29:1)1.02.03.04.06.010.01MTris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%過硫酸銨0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0040.0080.0120.0160.0240.04成分配制

4、不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)8%膠51015203050蒸餾水1.73.35.06.710.016.730%Acr-Bis(29:1)1.32.74.05.38.013.31MTris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%過硫酸銨0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0030.0060.0090.0120.0180.03成分配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)10%膠510152

5、03050蒸餾水1.32.74.05.38.013.330%Acr-Bis(29:1)1.73.35.06.710.016.71MTris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%過硫酸銨0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02成分配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)12%膠51015203050蒸餾水1.02.03.04.06.010.030%Acr-Bi

6、s(29:1)2.04.06.08.012.020.01MTris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%過硫酸銨0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02成分配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積(毫升)15%膠51015203050蒸餾水0.51.01.52.03.05.0專業(yè)資料值得擁有WORD格式整理30%Acr-Bis(29:1)2.55.07.510.01

7、5.025.01MTris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%過硫酸銨0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02注:如果配制非變性膠,參考上述配方,不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。1)按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠):成分配制不同體積SDS-PAGE濃縮膠所需各成分的體積(毫升)5%膠2346810蒸餾水1.42.12.74.

8、15.56.830%Acr-Bis(29:1)0.330.50.671.01.31.71MTris,pH8.80.250.380.50.751.01.2510%SDS0.020.030.040.060.080.110%過硫酸銨0.020.030.040.060.080.1TEMED0.0020.0030.0040.0060.0080.01TBST緩沖液每2L體積中含:1M

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