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1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像姓名：王心怡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：居勝紅2012-05-28中文摘要雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像第一章大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記目的：探討大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcelis，EPCs)體外分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法，對(duì)培養(yǎng)的EPCs進(jìn)行鑒定。觀察雙功能分子影像探針Conjugate1的細(xì)胞標(biāo)記情況。方法：取大鼠肱骨和股骨骨髓，密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，篩選出貼壁細(xì)胞，傳代培養(yǎng)。通過(guò)分析細(xì)胞形態(tài)、細(xì)
2、胞表面標(biāo)志物等方法鑒定EPCs。將新型順磁性／近紅外熒光探針Conjugatel與EPCs在體外共同孵育，觀察探針標(biāo)記情況。結(jié)果：大鼠骨髓懸液分離得到單個(gè)核細(xì)胞，體外培養(yǎng)后表現(xiàn)出內(nèi)皮細(xì)胞典型的“鋪路石”形態(tài)。細(xì)胞傳代四次后能夠內(nèi)吞乙?；兔芏戎鞍?ac—LDL)、結(jié)合凝集素-1(UEA-1)，具有內(nèi)皮細(xì)胞功能。P。代細(xì)胞表達(dá)EPCs表面標(biāo)志物CD34、CDl33、vWF、VEGFR一2，而成熟內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物CD31表達(dá)較弱。P。代EPCs能夠較好地吞噬雙功能分子影像探針Conjugate1，探針標(biāo)記率高達(dá)(96．7±2．6)％。結(jié)論：通過(guò)密度梯度離心法可以得到具有干細(xì)胞特性的大鼠
3、骨髓EPCs，這些EPCs具有分化增殖能力。新型雙功能分子影像探針Conjugate1的EPCs標(biāo)記率較高。關(guān)鍵詞：內(nèi)皮祖細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；鑒定；標(biāo)記東南大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的成像研究目的：內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)對(duì)腫瘤新生血管有重要意義。利用它的歸巢特性，EPCs可被用作腫瘤靶向成像。本實(shí)驗(yàn)使用含有近紅外熒光染料Cy5．5和磁共振T。陽(yáng)性對(duì)比劑Gd的雙功能分子影像探針Conjugate1對(duì)荷瘤鼠體內(nèi)移植的EPCs進(jìn)行活體示蹤和腫瘤成像，驗(yàn)證EPCs在腫瘤中的成血管作用，探討EPCs對(duì)
4、腫瘤及新生血管生長(zhǎng)的作用。方法：分離培養(yǎng)大鼠骨髓EPCs，將標(biāo)記或未標(biāo)記Conjugate1的EPCs經(jīng)心臟移植入人乳腺癌MDA—MB-231荷瘤鼠體內(nèi)。按多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行活體磁共振成像，通過(guò)T，加權(quán)像觀察EPCs的歸巢現(xiàn)象，T。map測(cè)算T。弛豫時(shí)間，通過(guò)T。加權(quán)像計(jì)算腫瘤體積。按設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行活體光學(xué)成像，觀察腫瘤信號(hào)改變。動(dòng)物處死后取出腫瘤及肝臟、脾臟、腎臟、肺組織進(jìn)行離體光學(xué)成像，觀察EPCs在各器官的分布情況。通過(guò)病理學(xué)方法驗(yàn)證成像結(jié)果，觀察EPCs的分化和成血管作用，計(jì)算腫瘤微血管密度。使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測(cè)量以上組織Gd含量。結(jié)果：移植Conjugate1標(biāo)記的EP
5、Cs后，磁共振T。加權(quán)像可以觀察到腫瘤內(nèi)不均勻高信號(hào)，T。弛豫時(shí)間顯著降低。在三周觀測(cè)期內(nèi)，EPCs移植對(duì)腫瘤體積沒(méi)有顯著影響?；铙w和離體腫瘤光學(xué)成像均表明腫瘤信號(hào)增強(qiáng)。病理學(xué)檢測(cè)證實(shí)，移植的EPCs能夠歸巢至腫瘤組織中，分化成為成熟內(nèi)皮細(xì)胞并參與形成新生血管，EPCs的移植在三周觀測(cè)期內(nèi)對(duì)腫瘤微血管密度沒(méi)有影響。各組織Gd含量測(cè)定證實(shí)Conjugate1標(biāo)記的EPCs在腫瘤、肝臟和脾臟中聚集。結(jié)論：磁共振和光學(xué)成像可以對(duì)Conjugate1標(biāo)記的EPCs進(jìn)行活體示蹤，EPCs在腫瘤血管新生化過(guò)程中起到重要作用。關(guān)鍵詞：內(nèi)皮祖細(xì)胞；磁共振成像；近紅外光學(xué)成像；細(xì)胞示蹤；血管新生化英文摘
6、要NoninvasiveImagingofEndothelialOn-1nvaSlvehelialProgenitorCellsinTumorNeovascularizationUsingaNovelDual--modalityParamagnetic／Near·-InfraredFluorescenceProbeAbstractPartIExperimentsonIsolation，Culture，IdentificationandLabelingofBoneMarrowEndothelialProgenitorCellsObjective：Toexplorethemethodsof
7、isolation，cultureandamplificationofbonemarrowendothelialprogenitorcells(EPCs)fromrats．Identifythemorphologyandcharacteristicsoftheculturedcellsand1abelthesecellswithanovelparamagnetic／near-infraredfluorescenceprobeConjugate1
