雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像

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1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像姓名:王心怡申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:居勝紅2012-05-28中文摘要雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像第一章大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記目的:探討大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcelis,EPCs)體外分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法,對培養(yǎng)的EPCs進(jìn)行鑒定。觀察雙功能分子影像探針Conjugate1的細(xì)胞標(biāo)記情況。方法:取大鼠肱骨和股骨骨髓,密度梯度離心法分離單個核細(xì)胞,篩選出貼壁細(xì)胞,傳代培養(yǎng)。通過分析細(xì)胞形態(tài)、細(xì)

2、胞表面標(biāo)志物等方法鑒定EPCs。將新型順磁性/近紅外熒光探針Conjugatel與EPCs在體外共同孵育,觀察探針標(biāo)記情況。結(jié)果:大鼠骨髓懸液分離得到單個核細(xì)胞,體外培養(yǎng)后表現(xiàn)出內(nèi)皮細(xì)胞典型的“鋪路石”形態(tài)。細(xì)胞傳代四次后能夠內(nèi)吞乙?;兔芏戎鞍?ac—LDL)、結(jié)合凝集素-1(UEA-1),具有內(nèi)皮細(xì)胞功能。P。代細(xì)胞表達(dá)EPCs表面標(biāo)志物CD34、CDl33、vWF、VEGFR一2,而成熟內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物CD31表達(dá)較弱。P。代EPCs能夠較好地吞噬雙功能分子影像探針Conjugate1,探針標(biāo)記率高達(dá)(96.7±2.6)%。結(jié)論:通過密度梯度離心法可以得到具有干細(xì)胞特性的大鼠

3、骨髓EPCs,這些EPCs具有分化增殖能力。新型雙功能分子影像探針Conjugate1的EPCs標(biāo)記率較高。關(guān)鍵詞:內(nèi)皮祖細(xì)胞;細(xì)胞培養(yǎng);鑒定;標(biāo)記東南大學(xué)碩士學(xué)位論文第二章雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的成像研究目的:內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)對腫瘤新生血管有重要意義。利用它的歸巢特性,EPCs可被用作腫瘤靶向成像。本實驗使用含有近紅外熒光染料Cy5.5和磁共振T。陽性對比劑Gd的雙功能分子影像探針Conjugate1對荷瘤鼠體內(nèi)移植的EPCs進(jìn)行活體示蹤和腫瘤成像,驗證EPCs在腫瘤中的成血管作用,探討EPCs對

4、腫瘤及新生血管生長的作用。方法:分離培養(yǎng)大鼠骨髓EPCs,將標(biāo)記或未標(biāo)記Conjugate1的EPCs經(jīng)心臟移植入人乳腺癌MDA—MB-231荷瘤鼠體內(nèi)。按多個時間點(diǎn)進(jìn)行活體磁共振成像,通過T,加權(quán)像觀察EPCs的歸巢現(xiàn)象,T。map測算T。弛豫時間,通過T。加權(quán)像計算腫瘤體積。按設(shè)計的時間點(diǎn)進(jìn)行活體光學(xué)成像,觀察腫瘤信號改變。動物處死后取出腫瘤及肝臟、脾臟、腎臟、肺組織進(jìn)行離體光學(xué)成像,觀察EPCs在各器官的分布情況。通過病理學(xué)方法驗證成像結(jié)果,觀察EPCs的分化和成血管作用,計算腫瘤微血管密度。使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測量以上組織Gd含量。結(jié)果:移植Conjugate1標(biāo)記的EP

5、Cs后,磁共振T。加權(quán)像可以觀察到腫瘤內(nèi)不均勻高信號,T。弛豫時間顯著降低。在三周觀測期內(nèi),EPCs移植對腫瘤體積沒有顯著影響?;铙w和離體腫瘤光學(xué)成像均表明腫瘤信號增強(qiáng)。病理學(xué)檢測證實,移植的EPCs能夠歸巢至腫瘤組織中,分化成為成熟內(nèi)皮細(xì)胞并參與形成新生血管,EPCs的移植在三周觀測期內(nèi)對腫瘤微血管密度沒有影響。各組織Gd含量測定證實Conjugate1標(biāo)記的EPCs在腫瘤、肝臟和脾臟中聚集。結(jié)論:磁共振和光學(xué)成像可以對Conjugate1標(biāo)記的EPCs進(jìn)行活體示蹤,EPCs在腫瘤血管新生化過程中起到重要作用。關(guān)鍵詞:內(nèi)皮祖細(xì)胞;磁共振成像;近紅外光學(xué)成像;細(xì)胞示蹤;血管新生化英文摘

6、要NoninvasiveImagingofEndothelialOn-1nvaSlvehelialProgenitorCellsinTumorNeovascularizationUsingaNovelDual--modalityParamagnetic/Near·-InfraredFluorescenceProbeAbstractPartIExperimentsonIsolation,Culture,IdentificationandLabelingofBoneMarrowEndothelialProgenitorCellsObjective:Toexplorethemethodsof

7、isolation,cultureandamplificationofbonemarrowendothelialprogenitorcells(EPCs)fromrats.Identifythemorphologyandcharacteristicsoftheculturedcellsand1abelthesecellswithanovelparamagnetic/near-infraredfluorescenceprobeConjugate1

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