基因ⅰ型乙腦病毒分離鑒定及熒光定量pcr診斷方法建立

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1、學(xué)校巧號(hào)１０１９９學(xué)＾２０１２５１２６０９０＾系秦Ｈ據(jù)：＾Ｗ碩±學(xué)位論文基因Ｉ型乙腦病毒分離鑒定及焚光定量ＰＣ民診斬方法建立Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ，－ｏｆＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲａｓｓａｆｏｒＪａａｎｅｓｅｙｐｅｎｃｅｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓｅ打ｏｔｅＩｐｇｙｐ學(xué)位申請(qǐng)人張輝導(dǎo)師姓名職稱朱光澤教授郭炭教授專業(yè)名稱中西醫(yī)結(jié)合臨床研巧方向現(xiàn)代醫(yī)技與中醫(yī)藥研究檢驗(yàn)培養(yǎng)方式全曰制申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)型專業(yè)學(xué)位

2、論文提交日期２０１５年３月分類(lèi)號(hào)密級(jí)ＵＤＣ編號(hào)碩±學(xué)位論文基因Ｉ型乙臘病毒分離鑒定及焚光定量ＰＣＲ診斷方法建立Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ，－ｔｏｆＲｅａｌｉｍｅＰＣＲａｓｓａ）ｒＪａａｎｅｓｅｙｆｔｐｅｎｃｅｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓｅｎｏｔｅＩｐｇｙｐ轉(zhuǎn)指導(dǎo)教師姓名：朱光譯教授郭疏教授（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)）申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩±專業(yè)名稱：中西醫(yī)結(jié)合臨床硏究方向：現(xiàn)代醫(yī)技與中醫(yī)藥硏究檢驗(yàn)論文提交日

3、期：２０１５年３月論文答辯日期：２０１５年６月學(xué)位授予單位：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)提交確認(rèn)；作者簽＾簽名；＾長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明，本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加Ｗ注明引用的內(nèi)容夕本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中Ｗ明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名＾如ｉ年／月分／＞關(guān)于學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬的聲明本人鄭重聲明：所呈交

4、的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下自選課題或?qū)煶袚?dān)的國(guó)家立項(xiàng)資助一的計(jì)劃課題的部分人在導(dǎo)師指導(dǎo)和資助下獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬，系本一權(quán)為長(zhǎng)春中區(qū)藥大學(xué)和本人導(dǎo)師所有。特此聲明－，本聲明的切法律責(zé)任由本人承扭。論文作者簽名教師簽《關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向有關(guān)機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)可＾將本學(xué)位論文的全部或＾１＾采用影印部分內(nèi)容編人有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)

5、位論文。，可（保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）論文作者簽名＾教師簽名?。墸牐桑崳娨麓褐嗅t(yī)藥大學(xué)２０１２屆碩壬學(xué)位論文目錄目錄中：＾摘要１英文摘要２英文縮略語(yǔ)３刖胃４娜綜述５１己型腦炎病毒的研究進(jìn)展５１．１乙腦的基因結(jié)構(gòu)６１．２乙型腦炎病毒的基因型及進(jìn)化６１．３乙型腦炎病毒的流行病學(xué)６４１．傳播媒介７１．５影響ＪＥＶ流行病學(xué)主耍因素９１６１１．發(fā)病機(jī)制１．７免疫１１２總結(jié)與展望１３一第章乙腦基因１４Ｉ型的分離和鑒定１４１

6、材料與方法２賊１６３小結(jié)２０２第二章蟲(chóng)媒病毒的分子流巧病學(xué)調(diào)查１１材料與方法２１２結(jié)果２２３?。牐樱玻矗崳姷冢日拢墸剩牛只颍尚鸵墓舛浚校妹穹椒ǖ慕ⅲ玻担崳姡墸保壊牧吓c方法２５２鄉(xiāng)２６３?。樱常保崳姡墸椋簦壵摚常玻崳姡壗Y(jié)ｉｆ３５長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)２０１２廟巧壬學(xué)位論文ａ錄致謝３６參考文獻(xiàn)３７長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)２０１２屆碩去學(xué)位Ａ文中文摘要中文摘要目的：流行性乙型腦炎是危害人類(lèi)健康比較嚴(yán)重的蟲(chóng)媒病毒。盡管目前乙腦的發(fā)?。崳娐视兴陆?，但發(fā)病區(qū)域仍呈現(xiàn)不斷擴(kuò)大

7、的趨勢(shì)，。加強(qiáng)己腦的監(jiān)測(cè)就可Ｗ評(píng)估該地區(qū)乙腦的流行狀況。蚊子是ＪＥＶ的主要傳播媒介，對(duì)蚊子的流行性乙型腦炎病毒和蟲(chóng)媒?。崳姸具M(jìn)行分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)疾病預(yù)防具有防范意義。－方法：首先將云南省景洪縣采集１５份蚊蟲(chóng)樣品研磨接種ＢＨＫ２１和Ｃ６／３６單層細(xì)胞，待出現(xiàn)細(xì)胞病變。提取病毒ＲＮＡ，并反轉(zhuǎn)錄ｃＤＮＡ進(jìn)行ＰＣＲ鑒定將目的基因克隆ＭＤ－到１８Ｔ。Ｐ載體，送上海生工測(cè)序同時(shí)進(jìn)行蓋塔病毒、辛德畢斯、基孔肯雅病毒的ＰＣ民鑒定，回收并測(cè)序。在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了乙腦基因Ｉ型標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，建立了基于ＳＹＢ民ｒｅｅｅａ－ｍｅＧｎＩ染料的Ｒ，

8、。ｌｔｉＰＣ民檢測(cè)方法選?。阎抵谱鳂?biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果：乙腦ＰＣＲ擴(kuò)増目的基因經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證為己腦基因Ｉ型，然后構(gòu)建應(yīng)用巧光定量ＰＣ民標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。研巧建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線能夠