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《家兔prrx基因家族克隆分析、原核表達(dá)及表達(dá)圖譜》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士學(xué)位論文題目家兔Prrx基因家族：克隆分析、原核表達(dá)及表達(dá)圖譜作者陳瑞完成日期2015年3月學(xué)科門類農(nóng)學(xué)專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)研究方向小動(dòng)物疾病指導(dǎo)教師楊曉農(nóng)教授學(xué)院（系、部）生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院授予學(xué)位日期年月日PrrxGeneFamilyofOryctolagusCuniculus:cloning,ProkaryoticExpressionandExpressionPatternByChenRuiAThesisSubmittedToSouthwestUniversityforNationalitiesinFul
2、fillmentoftheRequirementsForMasterDegreeSupervisorbyProfessorYangXiao-nongCollegeofLifeScienceandTechnology,SouthwestUniversityforNationalitiesChengdu,610041,P.R.ChinaMarch2015基金項(xiàng)目西南民族大學(xué)研究生創(chuàng)新型科研項(xiàng)目資助（批準(zhǔn)號(hào):CX2014SZ99）摘要Prrx1（MHox、k2、Pmx、Prx1）、Prrx2（S8、Prx2）和Pr
3、rx3（Prx3、SHOX2、SHOT、OG12）是高度保守的同源異型框基因轉(zhuǎn)錄因子。Prrx1缺乏鼠有腭裂，脊柱骨骼缺陷和四肢、頜骨、橈尺骨和脛腓骨輕微的組織發(fā)育不良。Prrx2缺乏小鼠基本無形態(tài)學(xué)變化，但有輕微的心肌功能異常。Prrx1和Prrx2都缺的表現(xiàn)型顯示它們?cè)诩怪?、舌骨弓、顱面、大動(dòng)脈弓、垂體和肢體發(fā)育都有重要影響。即使是在截肢的情況下，一些兩棲類動(dòng)物的受損部位可以再生，而且沒有瘢痕。這種完美的愈合過程涉及Prrx1基因，但對(duì)于哺乳動(dòng)物，在胚胎無瘢痕傷口愈合中起重要作用的是Prrx2基因。Prr
4、x3基因表達(dá)于胚胎期的中胚層和外胚層，與骨和軟骨的形成、大腦、脊髓、神經(jīng)、心臟、顱面部和近端肢體的發(fā)育有關(guān)。Prrx3基因的甲基化與肺癌具有密切關(guān)系，可能成為肺癌的早期篩查指標(biāo)。本研究旨在研究家兔Prrx1、Prrx2和Prrx3基因的結(jié)構(gòu)，表達(dá)圖譜和在不同時(shí)期各組織的動(dòng)態(tài)變化，為Prrx1、Prrx2和Prrx3基因的進(jìn)一步的研究和應(yīng)用提供參考。本研究主要獲得以下成果：1.本研究首次克隆得到新西蘭白兔Prrx1a（登錄號(hào)：KP726284）、Prrx1b（登錄號(hào)：KM222500.1）、Prrx2和Prrx
5、3（登錄號(hào)：KP726285）基因，并對(duì)其DNA序列和氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)的分析，預(yù)測(cè)其可能的生物活性、結(jié)構(gòu)及功能。2.本研究分別構(gòu)建了pET32a(+)-Prrx1a/Prrx1b/Prrx2/Prrx3四種原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化進(jìn)入BL21感受態(tài)細(xì)胞。用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，優(yōu)化IPTG誘導(dǎo)濃度、時(shí)間、溫度。超聲破碎，HistrapTMHP純化柱進(jìn)行純化，并用Westernblot證實(shí)了融合蛋白的抗原性良好，能夠被鼠抗人Prrx2IgG識(shí)別。3.本研究首次對(duì)新西蘭白兔的常用的六個(gè)內(nèi)參基因GAPDH、HPR
6、T1、18SrRNA、B2M、Sdha、β-actin的表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行比較。證實(shí)新西蘭白兔不同的發(fā)育時(shí)期和組織中，最穩(wěn)定的內(nèi)參基因不同。推薦在進(jìn)行新西蘭白兔的相關(guān)試驗(yàn)時(shí)，可以選擇上述表達(dá)最穩(wěn)定的至少3個(gè)內(nèi)參基因的幾何平均數(shù)作為標(biāo)準(zhǔn)化相關(guān)RT-PCR數(shù)據(jù)的指標(biāo)，以確保試驗(yàn)組個(gè)體間的差異最小，和小變量的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)分析。4.本研究首次用RT-PCR的方法確定不同發(fā)育階段各器官中新西蘭白兔Prrx1、Prrx2和Prrx3基因mRNA的表達(dá)量。并比較了部分器官中Prrx1的兩種變異剪切體Prrx1a和Prrx1b的表達(dá)
7、量差異。I5.用免疫組化的方法證實(shí)Prrx家族蛋白在新西蘭白兔各器官的表達(dá)。由于轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，mRNA的表達(dá)量與蛋白在各器官的表達(dá)量并不完全相同。然而，由于缺乏有效的單克隆抗體，不能有效區(qū)別幾種蛋白。關(guān)鍵詞：新西蘭白兔；成對(duì)相關(guān)同源異型框基因（Prrx）；克隆；生物信息學(xué)分析；融合蛋白表達(dá)；Westernblot分析；表達(dá)圖譜；內(nèi)參基因篩選IIPrrxGeneFamilyofOryctolagusCuniculus:cloning,prokaryoticexpressionandExpressionPatter
8、nGraguateStudent：ChenRuiDirector：YangXiao-nongAbstractPrrx1(MHox,k2,Pmx,Prrx1),Prrx2(S8,Prx2)andPrrx3（Prx3,SHOX2,SHOT，OG12）arebelongtohighlyconservativeHomeoboxgenefamily.ThePrrx1nullmicehaveacleftpala
