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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文番茄果實(shí)蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究姓名：孫麗萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：楊建平;于喜艷20050525關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位
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3、苗，具體的研究結(jié)果如下：用異硫氰酸胍．苯酚．氯仿一步法，提取番茄自交系20一19果實(shí)總RNA。經(jīng)測定表明，所提RNA無降解，純度高，符合實(shí)驗(yàn)要求。根據(jù)GenBank中已登記的番茄、馬鈴薯等蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列設(shè)計(jì)特異引物，通過RT-PCR方法，從番茄自交系20．19果實(shí)總RNA中克隆到目的片段，將其克隆入T載體進(jìn)行測序，結(jié)果表明該片段為目的基因的全長cDNA，長3373bp，編碼區(qū)序列長3162bp，編碼1054個(gè)氨基酸。序列分析表明，它與GenBank中登記號為AB051216的番茄蔗糖磷酸合成酶基因高度同源，核苷酸序列的同
4、源性為98％。與其它幾個(gè)種的同源性比較表明，所克隆的番茄SPS基因核苷酸序列與GenBank中登記號為X73477的馬鈴薯的同源性為96％，與登記號為AFl94022的普通煙草的同源性為92％，與登記號為AF439861的甜薯的同源性為82％。該基因已在GenBank中注冊，登記號為AY726439。通過番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化試驗(yàn)，確定番茄自交系T6種子消毒方法為先用酒精處理30秒，再用O．7％NaCLO(有效氯含量)處理20分鐘，最佳的愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽分化培養(yǎng)基為MS+ZT2．0mg／L+IAA0．5mg／L，最佳的生根壯苗培養(yǎng)
5、基為MS+IAA0．5mg／L，最適合做轉(zhuǎn)化的外植體為子葉，卡那霉素的晟終篩選濃度為50m∥L。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將甜瓜果實(shí)反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因轉(zhuǎn)化番茄自交系T6，得到了卡那霉素抗性苗。關(guān)鍵詞：番茄，蔗糖磷酸合成酶基因，克隆，遺傳轉(zhuǎn)化番茄果實(shí)蔗：糖餓敞合成酶基閑的克降和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究CloningofSucrosePhosphateSynthaseGeneinTomatoFruitandstudyontomatogenetictransformationsystemAbstractInthisresearch，wecloneds
6、ucrosephosphatesynthasegenecompleteeDNAfromtomatofruitviaRT-PCR，analyseditssequence，ItsaccessnumberinGenBankisAY726439．Theregenerationsystemof“T6”tomatowasoptimized。Melonfruitacidinvertasegeneantisensevectorwastransferredinto“T6”tomatomediatedbyagrobacteriumtumefacienss
7、trainLBA4404．Kanamycin—resistancetomatoplantletswereobtained．Thedetailsareasfollows：“20·19’'tomatofruittotalRNAwasextractedviaonestepofThiocynate—Phenol-Chloroformmethod．TheresultshowedthattheRNAextractedhadhighpurity．mettheneedofexperiment．TheRT-PCRprimersweredesignedb
8、asedontheconsensusdomainofsucrosephosphatesynthasegenesuchastomatoandpotatoregisteredinGenBank．Theaimedproduct
