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《番茄果實蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文番茄果實蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究姓名：孫麗萍申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：楊建平;于喜艷20050525關于學位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學位論文，是在導師指導下，獨立進行科學研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責任由本人承擔。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留和按要求向國家有關部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學可以將本學位
2、論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。論文作者簽名：豳半導師簽名：：齠￡差每FI期：22呸冬．汨膽四山東農(nóng)業(yè)人學顧i．學位論文番茄果實蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究摘要本試驗通過RT-PCR方法，克隆到了番茄果實蔗糖磷酸合成酶(SVS)基因全長cDNA，在GenBank中的登記號為AY726439。并以自交系T6為材料，對番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系進行了優(yōu)化，通過農(nóng)桿菌介導法，將甜瓜果實反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因轉(zhuǎn)化番茄，得到了卡那霉素抗性
3、苗，具體的研究結(jié)果如下：用異硫氰酸胍．苯酚．氯仿一步法，提取番茄自交系20一19果實總RNA。經(jīng)測定表明，所提RNA無降解，純度高，符合實驗要求。根據(jù)GenBank中已登記的番茄、馬鈴薯等蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列設計特異引物，通過RT-PCR方法，從番茄自交系20．19果實總RNA中克隆到目的片段，將其克隆入T載體進行測序，結(jié)果表明該片段為目的基因的全長cDNA，長3373bp，編碼區(qū)序列長3162bp，編碼1054個氨基酸。序列分析表明，它與GenBank中登記號為AB051216的番茄蔗糖磷酸合成酶基因高度同源，核苷酸序列的同
4、源性為98％。與其它幾個種的同源性比較表明，所克隆的番茄SPS基因核苷酸序列與GenBank中登記號為X73477的馬鈴薯的同源性為96％，與登記號為AFl94022的普通煙草的同源性為92％，與登記號為AF439861的甜薯的同源性為82％。該基因已在GenBank中注冊，登記號為AY726439。通過番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化試驗，確定番茄自交系T6種子消毒方法為先用酒精處理30秒，再用O．7％NaCLO(有效氯含量)處理20分鐘，最佳的愈傷組織誘導及不定芽分化培養(yǎng)基為MS+ZT2．0mg／L+IAA0．5mg／L，最佳的生根壯苗培養(yǎng)
5、基為MS+IAA0．5mg／L，最適合做轉(zhuǎn)化的外植體為子葉，卡那霉素的晟終篩選濃度為50m∥L。采用農(nóng)桿菌介導法，將甜瓜果實反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因轉(zhuǎn)化番茄自交系T6，得到了卡那霉素抗性苗。關鍵詞：番茄，蔗糖磷酸合成酶基因，克隆，遺傳轉(zhuǎn)化番茄果實蔗：糖餓敞合成酶基閑的克降和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究CloningofSucrosePhosphateSynthaseGeneinTomatoFruitandstudyontomatogenetictransformationsystemAbstractInthisresearch，wecloneds
6、ucrosephosphatesynthasegenecompleteeDNAfromtomatofruitviaRT-PCR，analyseditssequence，ItsaccessnumberinGenBankisAY726439．Theregenerationsystemof“T6”tomatowasoptimized。Melonfruitacidinvertasegeneantisensevectorwastransferredinto“T6”tomatomediatedbyagrobacteriumtumefacienss
7、trainLBA4404．Kanamycin—resistancetomatoplantletswereobtained．Thedetailsareasfollows：“20·19’'tomatofruittotalRNAwasextractedviaonestepofThiocynate—Phenol-Chloroformmethod．TheresultshowedthattheRNAextractedhadhighpurity．mettheneedofexperiment．TheRT-PCRprimersweredesignedb
8、asedontheconsensusdomainofsucrosephosphatesynthasegenesuchastomatoandpotatoregisteredinGenBank．Theaimedproduct
