大腸癌中EGFR、Ras蛋白表達及Kras基因突變的研究

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1、大腸癌中EGFR、Ras蛋白表達及K．ras基因突變的研究碩士生姓名：寺旨導教師：專業(yè)名稱：單寶珍劉麗娜教授內科學摘要背景與目的：大腸癌的發(fā)生與多種信號轉導通路的功能異常有關，其中的Ras／MAPK信號轉導通路是細胞外信號由膜外受體通過一系列基因誘發(fā)細胞核內反應的重要通路，其上游的EGFR基因是一種跨膜糖蛋白，在多種腫瘤包括大腸癌中均存在高表達。處于EGFR下游的K．ras癌基因為細胞外信號從EGFR傳至胞內的中介，在大腸癌中被認為是啟動癌變的關鍵基因之一，其主要以點突變的方式活化，且常見的突變

2、位點位于第2外顯子第12、13密碼子中。大量研究表明，EGFR、K．ra$基因與大腸癌的發(fā)生發(fā)展關系密切，但與大腸癌具體生物學行為間的關系的結論并不一致，且目前國內外將兩者結合用于在大腸癌中的蛋白表達的研究尚未見報道。本研究通過檢測大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜中EGFR、Ras蛋白的表達情況，以及他們與臨床病理特征的關系，旨從蛋白水平探討兩基因在大腸癌發(fā)生中的作用。另外通過分析部分大腸癌組織中K．ra8基因突變狀況及其與Ras蛋白表達的相關性，進而從基因水平探討K．ras基因在大腸癌發(fā)病中的作用機

3、制。方法：診斷明確的大腸癌手術切除標本115例，其中43例取癌旁黏膜組織(距腫瘤邊緣≥5em)，另取內鏡下切除大腸腺瘤標本36例。應用免疫組織化學方法檢測EGFR、Ras蛋白在大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜組織中的表達，分析兩種蛋白表達與臨床病理間的關系；從115例大腸癌組織中隨機選取70例，用PCR擴增一直接測序法檢測K．ra8基因第2外顯子12、13密碼子突變，分析K．ra8基因突變對Ras蛋白表達的影響及臨床意義。結果：1．EGFR蛋白陽性表達率在大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜組分別為62．6l％

4、(72／115)、30．56％(1l／36)與12．77％(6／47)，三者間有顯著性差異(P

5、白表達與大腸癌患者性別、年齡、腫瘤部位、分化程度、有無淋巴結轉移及遠處轉移無明顯相關性(P>0．05)。3．在低分化癌與高中分化癌組中Ras蛋白的陽性表達率分別為59．52％(25／42)與38．36％(28／73)，兩者有顯著性差異(P<0．05)。Ras蛋白的表達與大腸癌患者性別、年齡、腫瘤部位、浸潤深度、有無淋巴結轉移及遠處轉移無明顯相關性(P>O．05)。4．大腸癌中EGFR、Ras蛋白的表達呈正相關(r=0．354，P<0．05)。5．選取的70例大腸癌中K．ras基因突變率為3O％(

6、21／70)；其中第12位密碼子突變占66．67％(14／21)，突變位點均位于K—ras基因第12位密碼子第2位堿基上(G—T突變8例，G—A突變4例，G—C突變2例；G—T、G—A、G—C突變率分別為38．10％，19．05％，9．52％)；第13位密碼子突變率為33．33％(7／21)，突變位點位于K．ras基因第13位密碼子第l、2位堿基上(G—T突變4例，G—C突變2例，另一例有G—T和G—A兩種突變；G—T、G—A、G—C突變率分別為19．05％，4．76％，9．52％)。K．ras

7、基因突變在男女性別組的陽性率分別為20．93％(9／43)與44．44％(12／27)，兩者有顯著性差異(P0．05)。6．K—ras基因突變與Ras蛋白表達成正相關(r=0．237，P

8、達與腫瘤分化程度呈負相關。4．EGFR與Ras蛋白表達呈正相關，提示聯(lián)合檢測兩基因有助于大腸癌的診斷及預后評估。5．大腸癌中K．ras基因12密碼子G—T和G—A突變是主要的突變方式。12密碼子的突變可能為Ras蛋白增多的原因。關鍵詞：結直腸腫瘤表皮生長因子受體原癌基因ra$免疫組織化學2ProteinexpressionofEGFR、RasandgenemutationsofK．．rasincolorectalcarcinomaMasterdegreecandidate：ShanBaozhen