短柄草磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆與功能分析

短柄草磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆與功能分析

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1、目錄摘要???????????????????????..11.文獻綜述??????????????????????.21.1新犁不本科模式作物短柄草???????????????.21.2短柄草的研究進展.?????????????????.21.2.1短柄草生物學(xué)特性研究??????????????..21.2.2短柄草的分類地位????????????????31.2.3短柄草的遺傳學(xué)研究???????????????41.2.4短柄草的分子生物學(xué)研究??????????????41.2.5二:穗短柄草?????????????????.51.3植物的磷素營養(yǎng)及現(xiàn)狀???

2、?????????????..51.3.1磷元素在植物生長發(fā)育和新陳代謝中的作用????????..51.3.2土壤磷的利用與現(xiàn)狀???????????????61.3.3磷肥的使用與影響???????????????..61.4植物對低磷脅迫的響應(yīng)????????????????..71.4.1低磷脅迫對植物代謝的影響?????????????71.4.2植物對低磷脅迫的響應(yīng)??????????????.81.4.2.1根系形態(tài)的變化??????????????.81.4.2.2生理生化的變化??????????????..81.5磷轉(zhuǎn)運蛋白的研究現(xiàn)狀????????????

3、????..91.5.1磷轉(zhuǎn)運蛋白編碼基因的研究進展???????????.91.5.2磷轉(zhuǎn)運蛋白基岡的結(jié)構(gòu)特征????????????..101.5.3磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的組織差異性表達???????????101.5.4植物磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的功能鑒定???????????..1l1.5.4.1突變體互補分析??????????????.n1.5.4.2轉(zhuǎn)基因表達分析??????????????.122.引言???????????????????????.133.材料與方法?????????????????????.143.1實驗材料?.?.?.????????????????14

4、3.1.1植物材料??????????????????143.1.2實驗試齊q??????????????????143.2實驗方法????????????????????143.2.1基因克隆??????????????????.143.2.1.1宇列獲取與引物設(shè)計????????????..143.2.1.2Bd21總DNA的提取?????????????.153.2.1.3總RM的提取與純化????????????..163.2.1.4cDNA第一鏈的合成?????????????.163.2.1.5PCR擴增????????????????.173.2.1-6PCR產(chǎn)物

5、的l司收、連接和轉(zhuǎn)化??????????173.2.1.7重組克隆的篩選??????????????.183.2.1.8DNA測序????????????????.183.2.1.9質(zhì)粒提取????????????????.193.2.2擬南芥轉(zhuǎn)化?????????????????.193,2.2.1載體構(gòu)建????????????????.193.2.2.2農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備????????????..203.2.2.3農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化??????????????..203.2.2.4擬南芥植株的轉(zhuǎn)化?????????????.2l3.2.2.56US活性檢測??????????

6、?????213.2.3酵母互補功能驗證???????????????..2l3.2.3.1載體構(gòu)建????????????????2l3.2.4.組織特異性表達????????????????214結(jié)果與分析?????????????????????.224.1磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆與序列分析?????????????224.1.1短柄草中磷轉(zhuǎn)運蛋白的基岡預(yù)測???????????..224.1.2短柄草中磷轉(zhuǎn)運蛋白基因的克?。???????????224.2基岡結(jié)構(gòu)預(yù)測與Phtl家族成員的確定????????????274.3Phtl編碼氨基酸序列的生物信息學(xué)分析。?????

7、?????..294.3.1編碼氨基酸序列生物信息學(xué)分析???????????.294.3.2Phtl家族基因同源性分析???????????.??374.3.3進化樹分析???????????.??????384.5組織特異性表達??????????????????404.5低磷處理表達??????????????????..4l5.結(jié)論與討論?????????????????????.425.1磷轉(zhuǎn)運蛋白基因克隆????????????????..425.2Phtl家族生物信息學(xué)分析??

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