二穗短柄草gf 14-a-like基因的克隆、表達(dá)分析及遺傳轉(zhuǎn)化研究

《二穗短柄草gf 14-a-like基因的克隆、表達(dá)分析及遺傳轉(zhuǎn)化研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、分類號(hào)學(xué)號(hào)M201371621學(xué)校代碼10487密級(jí)碩士學(xué)位論文二穗短柄草GF14-A-like基因的克隆、表達(dá)分析及遺傳轉(zhuǎn)化研究學(xué)位申請(qǐng)人：吳春來(lái)學(xué)科專業(yè)：生物工程指導(dǎo)老師：汪越勝副教授答辯日期：2015年5月17日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofBiologicalEngineeringCloning,ExpressionAnalysisandGeneticTransformationofGF14-A-like

2、GenefromBrachypodiumdistachyonCandidate:ChunlaiWu：Major:BiologicalEngineering：Supervisor:Assoc：ProfYueshengWangHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2015獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果

3、。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽

4、名：日期：年月日日期：年月日華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要小麥?zhǔn)侵匾募Z食作物之一，由于小麥的基因組較為復(fù)雜，研究較為困難。二穗短柄草屬于早熟禾亞科，與禾本科的糧食作物小麥有比較近的親緣關(guān)系，因此研究二穗短柄草對(duì)于了解小麥具有重要的參考價(jià)值。二穗短柄草本身具有生長(zhǎng)周期短、基因組小、易于遺傳轉(zhuǎn)化的優(yōu)勢(shì)，并且基因組測(cè)序已經(jīng)完成，可以從基因組水平上開展更好的研究，已經(jīng)成為了一種新的模式生物。14-3-3蛋白普遍存在于植物體內(nèi)，可形成同源或異源二聚體，通過(guò)與磷酸化的靶蛋白互作改變其活性，參與植物基礎(chǔ)代謝、響應(yīng)非生物脅迫、調(diào)節(jié)體內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、參

5、與多種激素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要生理過(guò)程。然而，目前有關(guān)新型禾本科模式生物二穗短柄草14-3-3蛋白功能的研究還少有報(bào)道。本研究克隆得到了二穗短柄草14-3-3基因家族的一個(gè)基因，通過(guò)序列分析，將其命名為BdGF14-A-like。本研究主要結(jié)果如下：（1）BdGF14-A-like基因位于二穗短柄草三號(hào)染色體上，編碼區(qū)由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子組成，ORF長(zhǎng)度為753bp，編碼250個(gè)氨基酸。將該基因編碼蛋白與模式生物水稻和擬南芥中14-3-3家族成員進(jìn)行進(jìn)化樹分析，發(fā)現(xiàn)該蛋白與模式植物擬南芥GRF1和水稻中GF14a同源性最高。（

6、2）使用巢式PCR成功克隆了該基因，構(gòu)建表達(dá)載體，通過(guò)基因槍法介導(dǎo)的洋蔥亞細(xì)胞定位，進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)BdGF14-A-like在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中都有表達(dá)。（3）對(duì)二穗短柄草的根、莖、葉、果實(shí)進(jìn)行組織表達(dá)水平分析，發(fā)現(xiàn)BdGF14-A-like在根中表達(dá)量最低，在葉和果實(shí)中表達(dá)量較高。（4）通過(guò)半定量RT-PCR技術(shù)，分析了根和葉器官受到多種非生物逆境處理后該基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示BdGF14-A-like基因表達(dá)水平在根中ABA下調(diào)誘導(dǎo)，受NaCl上調(diào)誘導(dǎo)，在葉中受Ethrel(ETH)上調(diào)誘導(dǎo)。I華中科技大學(xué)碩士

7、學(xué)位論文（5）將構(gòu)建的植物過(guò)表達(dá)載體pBI121-BdGF14-A-like和空載pBI121利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法遺傳轉(zhuǎn)化煙草，成功獲得了22株轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)陽(yáng)性植株，將小苗移栽至溫室，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)成功收取了T1代種子。通過(guò)研究二穗短柄草BdGF14-A-like基因，可為小麥等重要糧食作物14-3-3蛋白抗逆性研究奠定一定的理論基礎(chǔ)，并為提高小麥抗性，改良其某些農(nóng)藝性狀等提供一定理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：二穗短柄草；14-3-3；BdGF14-A-like；亞細(xì)胞定位；表達(dá)分析；遺傳轉(zhuǎn)化II華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractWheati

8、soneoftheimportantfoodcrops.Itsresearchisstillachallengeduetothecomplexityofitsgenome.BrachypodiumdistachyonbelongstoPooidea