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《地塞米松對骨髓間充質干細胞增殖和分化的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、蘭州醫(yī)學院碩士學位論文地塞米松對骨髓間充質干細胞增殖和分化的影響姓名：劉杰申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（骨外）指導教師：孫正義;王栓科2003.4.1蘭州醫(yī)學院fi6111學位論義地塞米松對骨髓問充質干細胞增殖和分化的影響摘要目的分離培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓間充質干細胞：研究地塞米松對體外培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞增殖和分化的影響。方法分離j～7周齡昆明小鼠雙側股骨，用預冷的IMDM培養(yǎng)基沖洗出瞥髓，采用全骨髓培養(yǎng)法，以1×104個／cm?接種于25ml培養(yǎng)瓶內。接種約6～q天后，形成單層貼壁成纖維狀細胞，覆蓋培葬瓶壁約70％～80％的面積。用葛三代傳代細胞行各種組織特異性染色，進行培
2、養(yǎng)細胞的鑒定以及進行細胞生長曲線的測定。在此基礎上，在培養(yǎng)基內添加l×10“mol／乙的地塞米松，將細胞置入CO：孵箱中培養(yǎng)，同時做不加藥的空白對照。通過倒鼉相差顯微鏡觀察骨髓間充質干細胞增殖和分化情況，檢測上清液中堿性磷酸酶和骨鈣索含量。結果用全骨髓培養(yǎng)法獲得的細胞，行各種組織特異性染色后證實，該細胞非脂肪細胞、非軟骨細胞、非成骨細胞、非成纖維細胞。經(jīng)誘導培養(yǎng)后，方具有成骨細胞特性。所以可斷定，本實驗培養(yǎng)細胞為骨髓間充質干細胞。由生長曲線可知，加入1×10“mol／L地塞米松后，骨髓間充質干細胞的倍增時間，由36h延長為54h。進一步研究表明，在地塞米松濃度為l×10一mol
3、／L，骨髓闖充質干細胞密度為l×105／ml的培養(yǎng)條件，上清液中堿性磷酸酶(實驗組分別為：2．96+0．07，3．12±O．16，3．23±O．27，4．47±0．31，6．21±O．14：對照組分別為1．07±0．23，I．13±0．12，1．34±0．25，1．70_0．18．!11±O．24)和骨鈣素(實驗組分別為：未測出，O．42±0．10，0．57±0．2，蘭州阪學院碩．卜學位論史o．84±o．13，1．36±o．31：對照組分別為：未測出，未測出，未測出，未測出，未測出)含量增加，骨結節(jié)形成加速，與未加藥的對照組相比均統(tǒng)計學有顯著性差異。結論本實驗條件下，可以通過全
4、骨髓培養(yǎng)法獲得骨髓間充質二r細胞。該細胞體外生長穩(wěn)定．傳代后細胞適應性強，增殖較快，具有向成骨細胞分化的潛能。地塞米松抑制了骨髓間充質干細胞的增殖，延長了細胞倍增時間。但是，它可以促進其向成骨細胞其分化，大量表達成骨細胞特異性物質(ALP，OCN)，并且隨著培育時間的延長，促進鈣質沉著，迅速形成骨結節(jié)。關鍵詞細胞培養(yǎng)，種子細胞，地塞米松，骨髓間充質于細胞分化，增殖蘭¨{限學院娥{：學位論文Theeffectsofdexamethasoneonbiologicalcharacteristicsofbonemesench3，realstemcellsAbstraetobjectiv
5、eTocultureandidentifymicemesenchymalstemcellsfMSCs)．Theeffectsofdexamethasoneonthemesenchyrealstemceilsproliferationanddif·feremiatiohinvitrowereobservedandanalyzed．MethodsAfterthefemursweredissectedfrom5to7．week．oldmites．thebonenlalTov,wasflushedOUtwitllice·coldIMDMmedium．TheeelJwasplatedin
6、25mlcultureplateatl×l釅／mlandcultured蛀llt醞fibroblast-shapedcellsco、，ered60％一70％oftheculturedplatedafter6to8-day．The3rdpassengerwasstained磅tissuespeeifieialstaininginordertoidentifyculturedceils，andthecellgrowthCUlWewasobserved．The3rdpassagercellswereincubatedundertheconditionof37"C．95％relativ
7、ehumidityand5％C02．Subsequently，lx10喀mol／Ldexamethasone
8、‘。asaddedintoculturemediumtofeedagroupofmesenc-hymalstemcellsandthecomrolgroupswerecultured、vithomthemedicineatthesametime。Thedifferentiationandproliferationofthegroupswereobsen，edcontinuall3’u
