骨碎補總黃酮對骨髓間充質干細胞增殖與骨向分化的影響

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1、摘要論文題目：骨碎補總黃酮對骨髓間充質干細胞增殖與骨向分化的影響專業(yè)：內(nèi)科學碩士生：劉君靜指導教師：舒曉春摘要目的：建立大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)的體外培養(yǎng)體系，探索不同濃度骨碎補總黃酮對大鼠BMSCs增殖與骨向分化的作用，并進一步觀察骨碎補總黃酮作用于大鼠BMSCs后對成骨相關基因BMP2mRNA表達的影響。方法：1．全骨髓貼壁法對BMSCs進行分離純化，從形態(tài)學、表面抗原表達、細胞周期等生物學特性進行BMSCs鑒定。2．在含有不同濃度骨碎補總黃酮的條件培養(yǎng)基中，對大鼠BMSCs進行培養(yǎng)，采用MTT

2、方法對各濃度組BMSCs的增殖進行檢測。3．不同濃度骨碎補總黃酮作用于BMSCs7天和14天后，檢測堿性磷酸酶(ALP)的含量，并初步確定骨碎補總黃酮在BMSCs骨向誘導中的最佳濃度，并進一步對最佳濃度組進行ALP及礦化結節(jié)染色，以定性鑒定BMSCs誘導為成骨細胞。4．在骨碎補總黃酮最佳濃度組作用BMSCs7天和14天后，采用實時熒光RT-PCR的方法，檢測成骨相關基因BMP2mRNA的表達情況。結果：1．全骨髓接種48／J,時后多數(shù)貼壁細胞已完成貼壁，14天后達到85％融合。流式細胞儀檢測結果顯示，第3代細

3、胞Go／Gl期中細胞占95．29％，G2／M期為4．17％，S期為0．55％；其中細胞表面抗原陽性標志CD29占97．68％，陰性標志CD45、CD34分別為2．76％、7．93％。2．M1vr檢測顯示不同濃度組中以10‘49／1、10巧∥l組促增殖作用明顯，與無藥物對照組比較，有顯著性差異(P<0．05)，其中以10巧∥l濃度組作用最顯著。3．ALP定量檢測中，同無藥對照組相比，7天時1049／1，10一g／1、10’69／l'旨碎補總捅要黃酮組ALP表達明顯增多(P

4、；而14天時10之g／1、10‘4∥1、10。5∥l、10‘6∥l組表達明顯增多(PO。05)，且各組ALP表達量均較7天時增加。綜合各組對BMSCs增殖和分化影響的檢測結果，10。5∥l濃度組為促BMSCs骨向分化的最佳濃度組。4．以骨碎補總黃酮最佳濃度組對BMSCs進行誘導，ALP染色及礦化結節(jié)染色均顯示陽性，無藥對照組為陰性。5．同無藥物對照組相比，骨碎補總黃酮作用于BMSCs7天后BMP2mRNA的表達上調作用較弱，在14天后

5、其上調作用明顯增強(P值<0．05)。結論：1．采用全骨髓貼壁分離法可獲得較為純凈的BMSCs。2．10‘4∥1、10。5∥l骨碎補總黃酮組促BMSCs增殖作用明顯，以10。59／1,濃度組作用最好。3．10藝∥l、10‘4∥l，10。5∥l、10石∥l骨碎補總黃酮均有促BMSCs向成骨細胞分化作用，其作用隨骨碎補總黃酮濃度降低及時間延長而增加，其中以10弓朗、10石酣骨碎補總黃酮最明顯。4．10巧鮒骨碎補總黃酮為誘導BMSCs向成骨細胞分化的最佳濃度。5．10。5∥l骨碎補總黃酮能夠上調BMP2mRNA的表

6、達，提示骨碎補總黃酮誘導BMSCs骨向分化的可能作用機制。關鍵詞：骨碎補總黃酮，骨髓間充質干細胞，增殖，分化，骨質疏松癥IIABSTRACTTitle：TheEffectofTotalFlavonoidsofRhizomaDrynariaeonProliferationandobjeetiveOsteogenesisofCulturedBoneMasenchymalStemCellsMajor：InternalmedicineName：LiuJunjingSupervisor：ShuXiaochunTiffs

7、studyestablishedaculturesysteminvitroofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)andexploredtheeffectofdifferentconcentrationsoftotalflavonoidsofrhizomadrynariaeonproliferationandosteogenesisoftheculturedratBMSCs．Furthermore，itstudiedtheexpressionofBMP2mRNAin

8、ratBMSCsculturedinmediumwithtotalflavonoidsofrhizomadrynariae．Method1．BMSCsfromratbonemarrowwereisolatedandpurifiedbyusingdifferentialattachmenttechnique，andidentifiedbythebiologicalcharacteristicsucha