資源描述：
《脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達及結(jié)構(gòu)與功能分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、碩士學位論文脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達及結(jié)’構(gòu)與功能分析GeneCloning、Expression&StructureandFunctionalCharacterizationofCathelicidinsfromLimnonectesfragilis作者姓j名：學科、專業(yè)：學號：指導教師：王漁室副塾援完成日期：圣Q!圣生墨旦大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學學位論文獨創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導
2、下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請學位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。學位論文題目：喻盤趔燧厶也區(qū)籩缸迭圜互唐磊選隆緬斡妄盜醞歷廁作者簽名：：j猩逝日期：絲』墨年名月塵、大連理工大學碩士學位論文摘要Cathdiddins是一類由N端信號肽區(qū)域、中間保守eathelin結(jié)構(gòu)域和C端高度特異的成熟肽區(qū)域組成的宿主防御肽家族，是脊椎
3、動物自然免疫的關鍵因子，發(fā)揮著重要的抗微生物感染和病原體入侵效應，是連接自然免疫和特異性免疫的橋梁。迄今為止，在自然界幾乎所有脊椎動物，包括哺乳類、鳥類、爬行類和低等的魚類中均有發(fā)現(xiàn)，唯獨在兩棲類中幾乎沒有報道。在本論文中，我們首次報道了來源于兩棲類蛙科物種—脆皮大頭娃(Limnonectes肛硒凰)的eathelicidin基因。從所構(gòu)建的脆皮大頭蛙皮膚eDNA文庫中，首次克隆得到了兩條編碼cathelieidins前體的eDNA核酸序列。序列全長分別為586bp和596bp，由此推斷出的兩條c
4、athelicidin前體分別由155和151個氨基酸殘基組成。Blast比對分析，其結(jié)構(gòu)同樣包括N端信號肽區(qū)、中間保守的eathelin區(qū)和C端成熟肽區(qū)三部分。進化分析表明，兩棲類蛙科cathelieidins與爬行類(蛇)、鳥類(雞、鵪鶉、環(huán)頸雉)來源的eathelieidins在系統(tǒng)進化樹中獨立成簇，與這些物種的進化先后順序相吻合，這為eathelieidin基因家族的起源以及結(jié)構(gòu)多樣性和功能分化的進化機制研究，提供了非常有效的補充證據(jù)。對于不同物種而言，cathelicidin前體的酶切位
5、點不盡相同，而經(jīng)蛋白酶作用后釋放出來的成熟肽序列更是千差萬另IJ。比對后，根據(jù)eathelin區(qū)域中彈性蛋白酶(哺乳動物eathelieidin家族常見酶切位點，．Val．)和胰蛋白酶酶切位點(蛙類抗茵肽家族常見酶切位點，．Lys-Arg-或．姆Arg．)分別對這兩條前體肽中成熟肽的序列進行了預測，所推斷的四條成熟肽分別命名為Lf-CATHl／2與LfCATHl以a?；瘜W合成Lf-CATHl／2成熟肽，進行抗菌活性檢測，發(fā)現(xiàn)其對40種測試菌株均沒有抑菌活性。而經(jīng)大腸桿菌原核表達的Lf-CATHla
6、成熟肽，藥敏實驗顯示對金黃色葡萄球菌有抑菌圈。合成的Lf：CATHla對所測試的金黃色葡萄球菌ATCC25923、IS090223、ISl307、和大腸桿菌ATCC25922表現(xiàn)出較強的抗菌活性，且Lf-CATHla溶血活性和凝集素活性均不明顯。以上結(jié)果說明依據(jù)胰蛋白酶酶切位點釋放成熟肽的可能性較大。除此以外，LfCATHla還具有較強的抗氧化性，對DPPH自由基的清除率為57．79％。鑒于兩棲類復雜的生存環(huán)境，以上結(jié)果表明Lf-CATHla在宿主復雜的免疫機制中不僅起到抗微生物感染作用，而且還可
7、能發(fā)揮了其他重要功能，如抗氧化以保護兩棲類裸露的皮膚等。關鍵訶：脆皮大頭蛙；Cathelicidins；酶切位點；原核表達；結(jié)構(gòu)與功能脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達及結(jié)構(gòu)與功能分析GeneCloning，Expression＆S仃uctl】reandFunctionalCharacterizationofCathelicidinsfromLimnonectesfragilisAbstractCathelicidins，onefamilyofhostdefensepeptides
8、,arecharacterizedbyallN-terminalsignalpeptide，andaconservedcathelindomainfollowedbyahighlydivergentC-terminalmaturepeptide．Thefamileofcathelieidinsisthebridgetoconnectthenaturalandspecificinllnunesystem，whichse-1"veacriticalroleinvertebrateinn
