脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達(dá)及結(jié)構(gòu)與功能分析

《脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達(dá)及結(jié)構(gòu)與功能分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、碩士學(xué)位論文脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達(dá)及結(jié)’構(gòu)與功能分析GeneCloning、Expression&StructureandFunctionalCharacterizationofCathelicidinsfromLimnonectesfragilis作者姓j名：學(xué)科、專業(yè)：學(xué)號：指導(dǎo)教師：王漁室副塾援完成日期：圣Q!圣生墨旦大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)

2、下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文題目：喻盤趔燧厶也區(qū)籩缸迭圜互唐磊選隆緬斡妄盜醞歷廁作者簽名：：j猩逝日期：絲』墨年名月塵、大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要Cathdiddins是一類由N端信號肽區(qū)域、中間保守eathelin結(jié)構(gòu)域和C端高度特異的成熟肽區(qū)域組成的宿主防御肽家族，是脊椎

3、動物自然免疫的關(guān)鍵因子，發(fā)揮著重要的抗微生物感染和病原體入侵效應(yīng)，是連接自然免疫和特異性免疫的橋梁。迄今為止，在自然界幾乎所有脊椎動物，包括哺乳類、鳥類、爬行類和低等的魚類中均有發(fā)現(xiàn)，唯獨(dú)在兩棲類中幾乎沒有報道。在本論文中，我們首次報道了來源于兩棲類蛙科物種—脆皮大頭娃(Limnonectes肛硒凰)的eathelicidin基因。從所構(gòu)建的脆皮大頭蛙皮膚eDNA文庫中，首次克隆得到了兩條編碼cathelieidins前體的eDNA核酸序列。序列全長分別為586bp和596bp，由此推斷出的兩條c

4、athelicidin前體分別由155和151個氨基酸殘基組成。Blast比對分析，其結(jié)構(gòu)同樣包括N端信號肽區(qū)、中間保守的eathelin區(qū)和C端成熟肽區(qū)三部分。進(jìn)化分析表明，兩棲類蛙科cathelieidins與爬行類(蛇)、鳥類(雞、鵪鶉、環(huán)頸雉)來源的eathelieidins在系統(tǒng)進(jìn)化樹中獨(dú)立成簇，與這些物種的進(jìn)化先后順序相吻合，這為eathelieidin基因家族的起源以及結(jié)構(gòu)多樣性和功能分化的進(jìn)化機(jī)制研究，提供了非常有效的補(bǔ)充證據(jù)。對于不同物種而言，cathelicidin前體的酶切位

5、點(diǎn)不盡相同，而經(jīng)蛋白酶作用后釋放出來的成熟肽序列更是千差萬另IJ。比對后，根據(jù)eathelin區(qū)域中彈性蛋白酶(哺乳動物eathelieidin家族常見酶切位點(diǎn)，．Val．)和胰蛋白酶酶切位點(diǎn)(蛙類抗茵肽家族常見酶切位點(diǎn)，．Lys-Arg-或．姆Arg．)分別對這兩條前體肽中成熟肽的序列進(jìn)行了預(yù)測，所推斷的四條成熟肽分別命名為Lf-CATHl／2與LfCATHl以a?；瘜W(xué)合成Lf-CATHl／2成熟肽，進(jìn)行抗菌活性檢測，發(fā)現(xiàn)其對40種測試菌株均沒有抑菌活性。而經(jīng)大腸桿菌原核表達(dá)的Lf-CATHla

6、成熟肽，藥敏實驗顯示對金黃色葡萄球菌有抑菌圈。合成的Lf：CATHla對所測試的金黃色葡萄球菌ATCC25923、IS090223、ISl307、和大腸桿菌ATCC25922表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗菌活性，且Lf-CATHla溶血活性和凝集素活性均不明顯。以上結(jié)果說明依據(jù)胰蛋白酶酶切位點(diǎn)釋放成熟肽的可能性較大。除此以外，LfCATHla還具有較強(qiáng)的抗氧化性，對DPPH自由基的清除率為57．79％。鑒于兩棲類復(fù)雜的生存環(huán)境，以上結(jié)果表明Lf-CATHla在宿主復(fù)雜的免疫機(jī)制中不僅起到抗微生物感染作用，而且還可

7、能發(fā)揮了其他重要功能，如抗氧化以保護(hù)兩棲類裸露的皮膚等。關(guān)鍵訶：脆皮大頭蛙；Cathelicidins；酶切位點(diǎn)；原核表達(dá)；結(jié)構(gòu)與功能脆皮大頭蛙Cathelicidins基因克隆、表達(dá)及結(jié)構(gòu)與功能分析GeneCloning，Expression＆S仃uctl】reandFunctionalCharacterizationofCathelicidinsfromLimnonectesfragilisAbstractCathelicidins，onefamilyofhostdefensepeptides

8、,arecharacterizedbyallN-terminalsignalpeptide，andaconservedcathelindomainfollowedbyahighlydivergentC-terminalmaturepeptide．Thefamileofcathelieidinsisthebridgetoconnectthenaturalandspecificinllnunesystem，whichse-1"veacriticalroleinvertebrateinn