櫛孔扇貝免疫系統(tǒng)發(fā)生及母源免疫的初步研究

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1、ByFengYueADissenatiOnSubmittedtoTheUniVersit)rofChineseAcademyofSciencesIⅡpartialfumUmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceInsitituteofoceanology，ChineseAcademyofScienceApril，2013原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，

2、均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任人由本人承擔(dān)。論文作者簽名：荔斧日期：2彬繹矧?qū)W位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國科學(xué)院海洋研究所有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意海洋研究所保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國科學(xué)院海洋研究所可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽字：磊呤日期：2。侈中莎廳丑凋?qū)熀炞郑汉π沂乱兹掌冢簓／歹·r，扣久I致謝本論文是在導(dǎo)師宋林生研究員的悉心指導(dǎo)和親切關(guān)懷下完成的。從論文

3、的選題、實驗方案的設(shè)計到研究工作的開展和論文的撰寫都凝聚著導(dǎo)師辛勤的汗水。宋老師高尚的品德、淵博的學(xué)識、活躍的思維、精辟的見解、嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、刻苦的鉆研精神、忘我的工作熱情，永遠是我學(xué)習(xí)的楷模。在此謹向宋老師表示最衷心的感謝和最崇高的敬意。感謝本實驗室王玲玲、周智老師在實驗思路、論文撰寫和工作方法上的啟迪。感謝邱麗梅老師、張垣老師、王孟強老師、劉瑞老師在實驗過程中的指導(dǎo)和大力幫助。實驗室充滿活力而又團結(jié)奮進的團隊為我研究工作的順利開展提供了良好的環(huán)境。衷心感謝實驗室史曉委、楊傳燕、Vinu、孫志斌、王晶晶、王雷雷、高揚、孫瑞、馬兆鵬、蔣秋芬、衣啟麟、黃萌萌、張濤、張道翔、孫鑫和孫穎

4、等同學(xué)三年來對我的熱情關(guān)懷和無私幫助，你們的幫助是我論文順利完成的保證，與你們共同奮斗、共同進步、共同收獲的日子是我一生永遠難忘的精彩篇童。感謝中科院海洋所開放室高強老師、鄧涪老師、鄧田老師為本研究提供的便利條件，感謝研究生部各位老師給予我的支持和幫助。感謝中國海洋大學(xué)包振民教授及其課題組在實驗過程中給予我的熱情指導(dǎo)和幫助。特別感謝我的父母，你們對我始終如一的支持幫助和給予我的無私付出和真切期盼，永遠是我堅定信心、克服困難、勇攀高峰的動力源泉!衷心的祝愿你們永遠健康平安!感謝我親愛的妻子張靈燕多年來對我的關(guān)愛、理解和支持，我們攜手走過和將要走過的每一天都是我一生中最寶貴的財富。最后，

5、對所有在生活、學(xué)習(xí)和工作中關(guān)心、幫助和支持我的人表示誠摯的感謝。岳峰2013年4月于青島摘要櫛孔扇貝免疫系統(tǒng)發(fā)生及母源免疫的初步研究櫛孔扇貝是我國重要的海水養(yǎng)殖優(yōu)勢品種之～。然而近年來養(yǎng)殖病害頻發(fā)，特別是扇貝育苗期間苗種的病害問題，嚴重制約著扇貝養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)的發(fā)展。從個體發(fā)育早期免疫系統(tǒng)入手，深入研究扇貝免疫系統(tǒng)發(fā)生與發(fā)育的調(diào)控過程及母源免疫的作用機制，探討提高扇貝苗種免疫力的有效方法和途徑，創(chuàng)新苗種養(yǎng)殖方式，是保障扇貝養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的重要途徑。本論文以櫛孔扇貝為研究對象，采用分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)，分析了扇貝造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)和功能及其與免疫分子在扇貝早期發(fā)育中的時空表達

6、模式，初步探討了扇貝免疫系統(tǒng)發(fā)生過程；并研究了母源免疫分子的傳遞及傳代免疫效應(yīng)，揭示了母源免疫及其傳代效應(yīng)在扇貝發(fā)育早期免疫防御中的重要作用。1．櫛孔扇貝造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)和功能的鑒定與分析克隆獲得櫛孔扇貝造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C瓜unt、cfCB邛和C船ATA基因的cDNA序列。它們分別含有保守的mnt同源結(jié)構(gòu)域、cBFbeta結(jié)構(gòu)域和兩個ZnFGATA鋅指結(jié)構(gòu)域，分別屬于mnx、CB邱和GATAl23家族成員。體外重組蛋白C瓜unt和C硒ATA均能與特異DNA基序相結(jié)合，而CfCBFB能夠顯著促進c瓜unt的DNA結(jié)合活性。鰻弧菌刺激后，櫛孔扇貝循環(huán)血細胞數(shù)量在6h時顯著下降至最低值

7、，48h時與對照組差異不顯著：麗C儂unt和c疋BFBmIⅢA的表達分別于6．48h和6．96h顯著上調(diào)，C船ATAmRNA表達于6．12h時顯著下調(diào)。C依unt和C硒ATA基因干擾能夠引起櫛孔扇貝血細胞新生率和循環(huán)血細胞數(shù)量的顯著下降。在c儂unt基因干擾后，LPS刺激能夠顯著誘導(dǎo)c儂untmI礬A表達，并且血細胞新生率及循環(huán)血細胞數(shù)量均顯著升高；而C船ATA基因干擾后，LPS刺激未能引起C硒ATAmRNA表達、血細胞新生率及循環(huán)血細胞數(shù)量的顯著變化。以