BJS 201905 食品中羅丹明B的測(cè)定

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1、食品中羅丹明B的測(cè)定BJS2019051范圍本方法規(guī)定了食品中羅丹明B的液相色譜測(cè)定方法及液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜確證方法。本方法適用于半固態(tài)調(diào)味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜餞、水果干制品中羅丹明B的測(cè)定和確證。2原理試樣中羅丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，經(jīng)混合型陽離子固相萃取小柱凈化，采用液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試樣中檢出羅丹明B后采用液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1甲醇（CH3OH）：色譜純。3.2乙腈（C2H3N）：色譜純。3.3甲酸（CH2O2）：色譜純。3.4氨

2、水（NH?·H?O）：色譜純。3.5含0.1%甲酸的水溶液:取甲酸（3.3）1mL用水稀釋至1000mL，用濾膜（0.22μm，水相）過濾后備用。3.650%甲醇水溶液:準(zhǔn)確量取500mL甲醇（3.1）于1L容量瓶中，用水定容至刻度。3.7含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀釋至1000mL。3.8含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀釋至1000mL，濾膜（0.22μm，有機(jī)相）過濾后備用。3.9含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1mL甲酸（3.3）和35mL乙腈（3.2），用水稀釋至100mL，混勻。3.

3、10含5%氨水的甲醇溶液：取5mL氨水（3.4），用甲醇稀釋至100mL，混勻。（臨用現(xiàn)配）3.11羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品：羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品的分子式、相對(duì)分子量、英文名稱、CAS登錄號(hào)見表1，純度≥99%。表1羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量羅丹明BRhodamineB81-88-9C28H31ClN2O3479.013.12羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶

4、中，置于-18℃避光保存，有效期為6個(gè)月。3.13中間標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取0.5mL羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.12）于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，此溶液的濃度為500ng/mL。置于4℃避光保存，有效期為1個(gè)月。3.14標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）將中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.13）稀釋成0.0ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配。3.15混合型陽離子固相萃取柱（60mg/3mL）：基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物

5、，或相當(dāng)者。使用前依次用3mL甲醇，3mL水活化。3.16陶瓷均質(zhì)子。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。4.2液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI源）。4.3旋渦混合器。4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。4.5電子天平：感量分別為0.0001g和0.01g。4.6具塞離心管：50mL。4.7組織搗碎機(jī)。4.8固相萃取裝置。5試樣制備與保存5.1半固態(tài)調(diào)味料取適量樣品，搗碎，混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?.2花椒及花椒粉取適量樣品，粉碎后過40目篩，常溫保存?zhèn)溆谩?.3花椒油充分混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?.4牛肉干取適量樣品，搗碎，混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆谩?.5蜜

6、餞、水果干制品取適量樣品，搗碎，混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆谩?測(cè)定步驟6.1試樣前處理6.1.1提?。簻?zhǔn)確稱取2g（香辛料樣品稱取1g，精確至0.01g）試樣置于50mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入10.0mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液（3.7），混勻，加入陶瓷均質(zhì)子兩顆（調(diào)味油試樣除外），于旋渦混勻器上渦旋15min，于8000r/min離心10min，取3mL提取液層溶液過0.45μm有機(jī)相濾膜后待凈化。6.1.2凈化：準(zhǔn)確移取1.0mL提取液（6.1.1）至固相萃取柱（3.15）中，依次用3mL0.1%甲酸水溶液（3.5）、3mL水、3mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6mL氨水甲醇溶液（

7、3.10）洗脫目標(biāo)物，并收集洗脫液，洗脫溶液在45℃下，用氮?dú)獯抵两?，殘?jiān)?.0mL0.1%含酸的乙腈水溶液（3.9）溶解（香辛料樣液殘?jiān)?.5mL溶解），過0.22μm有機(jī)相濾膜上機(jī)測(cè)定。6.2儀器參考條件a)色譜柱：C18柱，4.6mm×100mm，粒徑3.5μm，或性能相當(dāng)者。b)流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液（3.5），B為乙腈（3.2），梯度洗脫程序見表2。c)流速：1.0mL/min。d)柱溫：35℃。e)進(jìn)樣量：10μL。f）激發(fā)波長(zhǎng)：550nm；發(fā)射波長(zhǎng)：580nm。表