《無菌操作技術》PPT課件

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1、無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制實驗目的：1、掌握實驗用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的滅菌方法—干熱滅菌、濕熱滅菌、紫外線滅菌及化學滅菌3、掌握培養(yǎng)基的配制及不同類型滅菌器的使用。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制一、實驗用器皿的清洗及洗滌液的配制1、洗滌液的種類及配制（1）去垢劑溶液（常用洗滌液）。生化去垢劑（detergent）A．中性去垢劑又稱非離子表面活性劑，對蛋白質的變性作用影響較少，宜于蛋白質或酶提取之用。一般市售有聚乙二醇類，如PEG200；多元醇類表面活性劑，如山梨醇、司班和吐溫類：司班-80和吐溫

2、-20無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制B．陰離子去垢劑：常見的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉。常用于核酸的提取。C．陽離子去垢劑：如潔爾滅、新潔爾滅、消毒凈等，消毒滅菌類居多。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制D．天然表面活性劑：又稱為生物表面活性劑，如各種樹膠（阿拉伯膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、多糖類（如環(huán)糊精）等。E．兩性表面活性劑：在堿性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質，起泡性好，去污力也強；在酸性溶液中則呈現(xiàn)陽離子表面活性劑特征，其殺菌性很強。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅

3、菌及培養(yǎng)基的配制（2）鉻酸洗液：[又稱重鉻酸鉀（或鈉）——濃硫酸洗滌液，簡稱洗液]廣泛用于玻璃儀器的洗滌。其配制方法如下：①稱取5g重鉻酸鉀(或鈉)粉末放入250ml燒杯中，加5ml水，盡量使其溶解。然后邊攪拌，邊緩緩注入濃H2SO4l00ml，待洗液溫度冷卻至40℃以下，將其轉移到具玻塞的細頸干燥的試劑瓶內貯存?zhèn)溆谩?②稱取10g重鉻酸鉀粉末置于500ml燒杯中，加水20ml，盡量使其溶解。然后慢慢注入濃H2SO4180ml，隨加隨攪拌。冷卻后貯于具玻塞的細頸試劑瓶中備用。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制（3）濃HCl（工業(yè)用）常用于洗去

4、水垢或某些無機鹽沉淀。（4）濃HNO3（常用于洗滌除去金屬離子）。（5）1mol/LKOH溶液。（6）8mol/L尿素洗滌液（PH1.0）適用于洗滌盛蛋白質溶液及血樣的器皿。（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器內壁污染的金屬離子。（8）5%-10%磷酸三鈉（Na3PO4·12H2O）溶液（用于洗滌油污物）。（9）氫氧化鉀（KOH）的乙醇溶液和含有高錳酸鉀的氫氧化鈉（NaOH）溶液，適用于清除容器內壁污垢，但這兩種強堿性洗滌液對玻璃儀器的侵蝕性很強，故洗滌時間不宜過長，使用時應小心慎重。（10）有機溶劑：丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脫油脂、

5、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脫油漆類污垢。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制2．玻璃儀器的清洗（1）初用玻璃儀器的洗滌新購置的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質，可先用去垢劑（0.5%水溶液）或肥皂水洗刷，再用自來水洗凈。然后浸泡1%—2%HCl溶液中過液，次日取出用自來水充分沖洗，最后再用蒸餾水漂洗數(shù)次，置烘箱內烘干或倒置晾干備用。（2）使用過的玻璃儀器的洗滌①一般玻璃儀器洗滌自來水沖洗→去垢劑洗滌或浸泡于0.5%去垢劑水溶液中→將器皿內外（特別是內壁）仔細刷洗后→自來水充分洗凈→蒸餾水漂洗數(shù)次，烘干或晾干備用。凡洗凈的玻璃器皿，其壁

6、上不沾有水珠，否則表示尚未洗凈，應按上述方法重新洗滌。量具玻璃儀器不能烘烤，只能晾干或風干無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制②移液管（吸量管）的洗滌移液管每次使用后須及時用流水沖洗或浸泡于冷水中，特別是吸取粘滯性較大的液體（全血、血漿、血清等）后應立即用流水充分沖洗，以免物質干涸和堵塞移液管。通常使用過的移液管經(jīng)自來水沖洗后，可浸泡于0.5%去垢劑溶液中或鉻酸洗液中過夜（不少于4h），然后分別用自來水充分沖洗和蒸餾水漂洗，晾干備用。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制③玻璃比色皿和石英比色皿的清洗比色皿使用后應立即用蒸餾

7、水充分沖洗，倒置在清潔處晾干備用。所有比色皿均可用0.5%去垢劑溶液洗滌，必須用脫脂棉小心地清洗，然后用大量蒸餾水充分漂洗干凈，倒置晾干。但不能用氫氧化鉀的乙醇溶液及其他強堿洗滌液清洗比色皿，因這樣導致比色皿的嚴重腐蝕。無菌操作技術（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制3．塑料器皿的洗滌新購買的塑料器皿：自來水清洗后→8mol·L-1尿素溶液（PH1.0）洗滌，→蒸餾水漂洗→1mol/LKOH溶液洗滌→蒸餾水漂洗→10-3mol/LEDTA溶液洗滌，以除去污染的金屬離子→雙蒸餾水充分漂洗，倒置晾干備用。使用后塑料器皿:0.5%去垢劑溶液洗滌→自來水充分沖