《無(wú)菌操作技術(shù)》PPT課件

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1、無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握實(shí)驗(yàn)用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的滅菌方法—干熱滅菌、濕熱滅菌、紫外線滅菌及化學(xué)滅菌3、掌握培養(yǎng)基的配制及不同類型滅菌器的使用。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制一、實(shí)驗(yàn)用器皿的清洗及洗滌液的配制1、洗滌液的種類及配制（1）去垢劑溶液（常用洗滌液）。生化去垢劑（detergent）A．中性去垢劑又稱非離子表面活性劑，對(duì)蛋白質(zhì)的變性作用影響較少，宜于蛋白質(zhì)或酶提取之用。一般市售有聚乙二醇類，如PEG200；多元醇類表面活性劑，如山梨醇、司班和吐溫類：司班-80和吐溫

2、-20無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制B．陰離子去垢劑：常見(jiàn)的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉。常用于核酸的提取。C．陽(yáng)離子去垢劑：如潔爾滅、新潔爾滅、消毒凈等，消毒滅菌類居多。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制D．天然表面活性劑：又稱為生物表面活性劑，如各種樹(shù)膠（阿拉伯膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、多糖類（如環(huán)糊精）等。E．兩性表面活性劑：在堿性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質(zhì)，起泡性好，去污力也強(qiáng)；在酸性溶液中則呈現(xiàn)陽(yáng)離子表面活性劑特征，其殺菌性很強(qiáng)。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅

3、菌及培養(yǎng)基的配制（2）鉻酸洗液：[又稱重鉻酸鉀（或鈉）——濃硫酸洗滌液，簡(jiǎn)稱洗液]廣泛用于玻璃儀器的洗滌。其配制方法如下：①稱取5g重鉻酸鉀(或鈉)粉末放入250ml燒杯中，加5ml水，盡量使其溶解。然后邊攪拌，邊緩緩注入濃H2SO4l00ml，待洗液溫度冷卻至40℃以下，將其轉(zhuǎn)移到具玻塞的細(xì)頸干燥的試劑瓶?jī)?nèi)貯存?zhèn)溆谩?②稱取10g重鉻酸鉀粉末置于500ml燒杯中，加水20ml，盡量使其溶解。然后慢慢注入濃H2SO4180ml，隨加隨攪拌。冷卻后貯于具玻塞的細(xì)頸試劑瓶中備用。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制（3）濃HCl（工業(yè)用）常用于洗去

4、水垢或某些無(wú)機(jī)鹽沉淀。（4）濃HNO3（常用于洗滌除去金屬離子）。（5）1mol/LKOH溶液。（6）8mol/L尿素洗滌液（PH1.0）適用于洗滌盛蛋白質(zhì)溶液及血樣的器皿。（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器內(nèi)壁污染的金屬離子。（8）5%-10%磷酸三鈉（Na3PO4·12H2O）溶液（用于洗滌油污物）。（9）氫氧化鉀（KOH）的乙醇溶液和含有高錳酸鉀的氫氧化鈉（NaOH）溶液，適用于清除容器內(nèi)壁污垢，但這兩種強(qiáng)堿性洗滌液對(duì)玻璃儀器的侵蝕性很強(qiáng)，故洗滌時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，使用時(shí)應(yīng)小心慎重。（10）有機(jī)溶劑：丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脫油脂、

5、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脫油漆類污垢。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制2．玻璃儀器的清洗（1）初用玻璃儀器的洗滌新購(gòu)置的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質(zhì)，可先用去垢劑（0.5%水溶液）或肥皂水洗刷，再用自來(lái)水洗凈。然后浸泡1%—2%HCl溶液中過(guò)液，次日取出用自來(lái)水充分沖洗，最后再用蒸餾水漂洗數(shù)次，置烘箱內(nèi)烘干或倒置晾干備用。（2）使用過(guò)的玻璃儀器的洗滌①一般玻璃儀器洗滌自來(lái)水沖洗→去垢劑洗滌或浸泡于0.5%去垢劑水溶液中→將器皿內(nèi)外（特別是內(nèi)壁）仔細(xì)刷洗后→自來(lái)水充分洗凈→蒸餾水漂洗數(shù)次，烘干或晾干備用。凡洗凈的玻璃器皿，其壁

6、上不沾有水珠，否則表示尚未洗凈，應(yīng)按上述方法重新洗滌。量具玻璃儀器不能烘烤，只能晾干或風(fēng)干無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制②移液管（吸量管）的洗滌移液管每次使用后須及時(shí)用流水沖洗或浸泡于冷水中，特別是吸取粘滯性較大的液體（全血、血漿、血清等）后應(yīng)立即用流水充分沖洗，以免物質(zhì)干涸和堵塞移液管。通常使用過(guò)的移液管經(jīng)自來(lái)水沖洗后，可浸泡于0.5%去垢劑溶液中或鉻酸洗液中過(guò)夜（不少于4h），然后分別用自來(lái)水充分沖洗和蒸餾水漂洗，晾干備用。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制③玻璃比色皿和石英比色皿的清洗比色皿使用后應(yīng)立即用蒸餾

7、水充分沖洗，倒置在清潔處晾干備用。所有比色皿均可用0.5%去垢劑溶液洗滌，必須用脫脂棉小心地清洗，然后用大量蒸餾水充分漂洗干凈，倒置晾干。但不能用氫氧化鉀的乙醇溶液及其他強(qiáng)堿洗滌液清洗比色皿，因這樣導(dǎo)致比色皿的嚴(yán)重腐蝕。無(wú)菌操作技術(shù)（一）—器皿的清洗、包扎、滅菌及培養(yǎng)基的配制3．塑料器皿的洗滌新購(gòu)買的塑料器皿：自來(lái)水清洗后→8mol·L-1尿素溶液（PH1.0）洗滌，→蒸餾水漂洗→1mol/LKOH溶液洗滌→蒸餾水漂洗→10-3mol/LEDTA溶液洗滌，以除去污染的金屬離子→雙蒸餾水充分漂洗，倒置晾干備用。使用后塑料器皿:0.5%去垢劑溶液洗滌→自來(lái)水充分沖