微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作規(guī)范

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1、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作規(guī)范一、無(wú)菌操作要求食品微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念，許多試驗(yàn)要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行，主要原因：一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。1.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。2.進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。3.接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?.進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%

2、酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。5.從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。7.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。8.吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。二、無(wú)菌間使用要求1.無(wú)菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開(kāi)，并設(shè)有與無(wú)菌間大小相應(yīng)的緩沖

3、間及推拉門，另設(shè)有0.5-0.7m2的小窗，以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。2.無(wú)菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。3.無(wú)菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開(kāi)紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。4.處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。5.在無(wú)菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有

4、過(guò)濾裝置。三、消毒滅菌要求???微生物檢測(cè)用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。??1．滅菌前準(zhǔn)備（1）所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開(kāi)。（2）裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。2．裝放（1）干熱滅菌器：裝放物品不可過(guò)擠，且不能接觸箱的四壁。（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過(guò)擠。3．設(shè)備檢查（1）檢查門的開(kāi)關(guān)是否靈活，橡皮圈有無(wú)損壞，是否平整。（2）壓力表蒸氣排盡時(shí)是

5、否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計(jì)所標(biāo)示的狀況是否吻合，管道有無(wú)堵塞。（3）對(duì)有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，是否符合于進(jìn)行滅菌處理的要求。4．滅菌處理手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進(jìn)行：a.手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變混濁需更換）。b.手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無(wú)軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。c.蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開(kāi)頂蓋上的排氣閥放

6、了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。d.關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時(shí)間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）。e.達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，對(duì)需干燥的物品，立即打開(kāi)排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開(kāi)蓋取物，如為液體物品，不要打開(kāi)排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開(kāi)蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。5.滅菌溫度與時(shí)間滅菌溫度121℃滅菌時(shí)間培養(yǎng)基等（易蒸發(fā)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)易分解）物質(zhì)一般滅菌20~30min器皿類物品一般滅菌時(shí)間不低于1h6.滅菌后的檢查滅菌后物品,按正常情況已屬無(wú)

7、菌,從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置,以免再度污染.(1)物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無(wú)菌物品使用.(2)取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無(wú)菌物品使用.(3)培養(yǎng)基或試劑等,應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài),未達(dá)到者應(yīng)廢棄.(4)啟閉式容器,在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉.(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到污染,不可作為無(wú)菌物品使用.(6)取出的合格滅菌物品,應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi),嚴(yán)禁與未滅菌物品混放.(7)凡屬合格物品,應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限.(8)每批滅菌處理完成后,記錄滅菌品名、

8、數(shù)量、溫度、時(shí)間、操作者。四、有毒有菌污物處理要求微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理