微生物實驗室技術(shù)操作規(guī)范

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1、實驗室技術(shù)操作規(guī)范一、無菌操作要求食品微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多試驗要求在無菌條件下進行，主要原因：一是防止試驗操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。1.接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。2.進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。3.接種食品樣品時，應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?.進行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%

2、酒精點燃燒灼三次后使用。5.從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。7.接種環(huán)和針在接種細菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。8.吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。二、無菌間使用要求1.無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖

3、間及推拉門，另設(shè)有0.5-0.7m2的小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。2.無菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實驗無關(guān)的物品。3.無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。4.處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。5.在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時，則應(yīng)有

4、過濾裝置。三、消毒滅菌要求???微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。??1．滅菌前準備（1）所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開。（2）裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。2．裝放（1）干熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過擠。3．設(shè)備檢查（1）檢查門的開關(guān)是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。（2）壓力表蒸氣排盡時是

5、否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。（3）對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，是否符合于進行滅菌處理的要求。4．滅菌處理手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進行：a.手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時應(yīng)將水量補足，水變混濁需更換）。b.手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。c.蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放

6、了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。d.關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）。e.達到規(guī)定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。5.滅菌溫度與時間滅菌溫度121℃滅菌時間培養(yǎng)基等（易蒸發(fā)、營養(yǎng)物質(zhì)易分解）物質(zhì)一般滅菌20~30min器皿類物品一般滅菌時間不低于1h6.滅菌后的檢查滅菌后物品,按正常情況已屬無

7、菌,從滅菌器中取出應(yīng)仔細檢查放置,以免再度污染.(1)物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用.(2)取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用.(3)培養(yǎng)基或試劑等,應(yīng)檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài),未達到者應(yīng)廢棄.(4)啟閉式容器,在取出時應(yīng)將篩孔關(guān)閉.(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到污染,不可作為無菌物品使用.(6)取出的合格滅菌物品,應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi),嚴禁與未滅菌物品混放.(7)凡屬合格物品,應(yīng)標有滅菌日期及有效期限.(8)每批滅菌處理完成后,記錄滅菌品名、

8、數(shù)量、溫度、時間、操作者。四、有毒有菌污物處理要求微生物實驗所用實驗器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理