生物化學(xué)實驗二費林試劑熱滴定定糖法

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1、實驗二費林試劑熱滴定定糖法13生物基地201300140059劉洋2015-03-28同組者：張奕一、實驗?zāi)康?、初步掌握費林試劑熱滴定定糖法的原理和方法。2、正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點。二、實驗原理還原糖是指含有自由醛展（如：葡萄糖咸酮基（如：果糖）的單糖和某些二糖（如：乳糖、麥芽糖）。在堿性溶液屮，還原糖能將金屬離子（Cu2+、Hg2+、Ag+等）還原，而糖木身被氧化成各種輕酸類化合物。該特性常用于糖的定性和定量測定。本實驗采用費林試劑熱滴定法，費林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和次叩基藍（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化

2、鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵觥化鉀。當卬、乙兩溶液混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物。萬能夾鐵架臺點滴板水浴鍋600瓦電爐三、實驗器材25毫升堿滴定管移液管（5、10毫升）100毫升溶量瓶100毫升錐形瓶滴管四、實驗試劑[1]費林試劑（定量）：（1）費林甲液:稱取15克硫酸銅（CuSO4?5H2O）和0.05克次甲基藍,溶于1000毫升水中。（2）費林乙液：稱収50克酒石酸鉀鈉、54克氧氧化鈉和4克亞詼鍬化鉀溶于1000毫升水中。[2]標準葡萄糖溶液：稱収匍萄糖（預(yù)先在105°C烘

3、T?，恒重）1克，用少量蒸錨水溶解后加入8毫升濃鹽酸（防止微生物生長），再用蒸錨水定容至1000毫升。[3]6N鹽酸溶液。[4]10%氮氧化鈉溶液。[5]碘試劑：將碘化鉀20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀釋10倍。[6]PH1-14試紙。五、實驗步驟1?空白測定準確吸取費林甲、乙液各5毫升和蒸憎水5毫升放入250毫升的錐形瓶中，再用滴定管加入一定量的標準葡萄糖液，混勻后放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶內(nèi)溶液在2分鐘內(nèi)達到沸騰，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入標準匍萄糖液直至藍色消失為I匕。沸騰前加入的標準葡萄糖液量與沸騰后滴定時所用的標準葡萄糖液量的

4、總和，就是測定空H時耗用的標準葡萄糖液亳升數(shù)(VI)0全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進行，一般應(yīng)在3分鐘內(nèi)完成。內(nèi)此，除控制滴定速度外,滴定前需加入一部分標準葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗時確定，同時練習(xí)掌握操作條件2?總糖的測定準確稱取面粉1克，加入6“鹽酸10毫升，蒸帑水15毫升，混勻。沸水浴加熱半小時后，取出兒滴水解液用碘化鉀■碘溶液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍色。冷卻后用10%氫氧化鈉屮和至屮性溶液，過濾，濾液定容至100毫升。準確吸取該溶液10毫升，移入100毫升容量瓶內(nèi)并定容至刻度，即為測定總糖的樣品

5、液。準確吸取樣品液5毫升放于100毫升錐形瓶內(nèi)，加入費林甲液、乙液各5毫升，混勻，然后按測定空白同樣操作進行滴定，記下耗用標準葡萄糖的毫升數(shù)。3.計算(V1-V2)X標準葡萄糖液濃度(克/毫升)X稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)％=X100稱取的樣品量(克)X5式川：VI為測定空口時耗用標準繭萄糖液毫升數(shù)。V2為測定總糖時耗用的標準葡萄糖的毫升數(shù)。六、實驗結(jié)果空白組:滴定前加入量Nl(ml)5滴定消耗N2(ml)7.652(棄掉)5.4515.5525.503V1=(N1+N2)(ml)/10.45110.55210.503平均值Vr(ml)10.502樣品組:

6、滴定前加入量N3(ml)4滴定消耗N4(ml)3.5503.9524.003V2=(N3+N4)(ml)7.5507.9528.003平均值V2*(ml)10.502還原糖％=(vr-V2，)一5X100%=53.34%七、討論與結(jié)論本次實驗結(jié)果不是很令人滿童，總結(jié)如下：1.對于堿式滴定管操作不熟練，經(jīng)常在擠壓玻璃珠時導(dǎo)致液體不受控制地持續(xù)流出，使得該組試驗結(jié)果作廢。2.最初幾組滴定由于對滴定重點的顏色變化不熟悉，導(dǎo)致經(jīng)常滴定過量，由于時間原伙I,無法多次重復(fù)實驗，使得單組實驗結(jié)杲ZI'可方差較大。3.滴定時有幾紐滴定速度沒有控制好，導(dǎo)致滴定時間超過3m

7、in,使得溶液被氧化，提而達到滴定重點。