生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)二費(fèi)林試劑熱滴定定糖法

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1、實(shí)驗(yàn)二費(fèi)林試劑熱滴定定糖法13生物基地201300140059劉洋2015-03-28同組者：張奕一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、初步掌握費(fèi)林試劑熱滴定定糖法的原理和方法。2、正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)原理還原糖是指含有自由醛展（如：葡萄糖咸酮基（如：果糖）的單糖和某些二糖（如：乳糖、麥芽糖）。在堿性溶液屮，還原糖能將金屬離子（Cu2+、Hg2+、Ag+等）還原，而糖木身被氧化成各種輕酸類化合物。該特性常用于糖的定性和定量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法，費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和次叩基藍(lán)（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化

2、鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵觥化鉀。當(dāng)卬、乙兩溶液混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物。萬能夾鐵架臺(tái)點(diǎn)滴板水浴鍋600瓦電爐三、實(shí)驗(yàn)器材25毫升堿滴定管移液管（5、10毫升）100毫升溶量瓶100毫升錐形瓶滴管四、實(shí)驗(yàn)試劑[1]費(fèi)林試劑（定量）：（1）費(fèi)林甲液:稱取15克硫酸銅（CuSO4?5H2O）和0.05克次甲基藍(lán),溶于1000毫升水中。（2）費(fèi)林乙液：稱収50克酒石酸鉀鈉、54克氧氧化鈉和4克亞詼鍬化鉀溶于1000毫升水中。[2]標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：稱収匍萄糖（預(yù)先在105°C烘

3、T?，恒重）1克，用少量蒸錨水溶解后加入8毫升濃鹽酸（防止微生物生長(zhǎng)），再用蒸錨水定容至1000毫升。[3]6N鹽酸溶液。[4]10%氮氧化鈉溶液。[5]碘試劑：將碘化鉀20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀釋10倍。[6]PH1-14試紙。五、實(shí)驗(yàn)步驟1?空白測(cè)定準(zhǔn)確吸取費(fèi)林甲、乙液各5毫升和蒸憎水5毫升放入250毫升的錐形瓶中，再用滴定管加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液，混勻后放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶?jī)?nèi)溶液在2分鐘內(nèi)達(dá)到沸騰，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)匍萄糖液直至藍(lán)色消失為I匕。沸騰前加入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量與沸騰后滴定時(shí)所用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量的

4、總和，就是測(cè)定空H時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液亳升數(shù)(VI)0全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進(jìn)行，一般應(yīng)在3分鐘內(nèi)完成。內(nèi)此，除控制滴定速度外,滴定前需加入一部分標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗(yàn)時(shí)確定，同時(shí)練習(xí)掌握操作條件2?總糖的測(cè)定準(zhǔn)確稱取面粉1克，加入6“鹽酸10毫升，蒸帑水15毫升，混勻。沸水浴加熱半小時(shí)后，取出兒滴水解液用碘化鉀■碘溶液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后用10%氫氧化鈉屮和至屮性溶液，過濾，濾液定容至100毫升。準(zhǔn)確吸取該溶液10毫升，移入100毫升容量瓶?jī)?nèi)并定容至刻度，即為測(cè)定總糖的樣品

5、液。準(zhǔn)確吸取樣品液5毫升放于100毫升錐形瓶?jī)?nèi)，加入費(fèi)林甲液、乙液各5毫升，混勻，然后按測(cè)定空白同樣操作進(jìn)行滴定，記下耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。3.計(jì)算(V1-V2)X標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升)X稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)％=X100稱取的樣品量(克)X5式川：VI為測(cè)定空口時(shí)耗用標(biāo)準(zhǔn)繭萄糖液毫升數(shù)。V2為測(cè)定總糖時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果空白組:滴定前加入量Nl(ml)5滴定消耗N2(ml)7.652(棄掉)5.4515.5525.503V1=(N1+N2)(ml)/10.45110.55210.503平均值Vr(ml)10.502樣品組:

6、滴定前加入量N3(ml)4滴定消耗N4(ml)3.5503.9524.003V2=(N3+N4)(ml)7.5507.9528.003平均值V2*(ml)10.502還原糖％=(vr-V2，)一5X100%=53.34%七、討論與結(jié)論本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是很令人滿童，總結(jié)如下：1.對(duì)于堿式滴定管操作不熟練，經(jīng)常在擠壓玻璃珠時(shí)導(dǎo)致液體不受控制地持續(xù)流出，使得該組試驗(yàn)結(jié)果作廢。2.最初幾組滴定由于對(duì)滴定重點(diǎn)的顏色變化不熟悉，導(dǎo)致經(jīng)常滴定過量，由于時(shí)間原伙I,無法多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，使得單組實(shí)驗(yàn)結(jié)杲ZI'可方差較大。3.滴定時(shí)有幾紐滴定速度沒有控制好，導(dǎo)致滴定時(shí)間超過3m

7、in,使得溶液被氧化，提而達(dá)到滴定重點(diǎn)。