總糖和還原糖的測定(費(fèi)林試劑熱滴定法)

《總糖和還原糖的測定(費(fèi)林試劑熱滴定法)》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、總糖和還原糖的測定──費(fèi)林試劑熱滴定法目的要求：掌握還原糖和總糖的測定原理，學(xué)習(xí)用直接滴定法測定還原糖的方法。實(shí)驗(yàn)原理：?還原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的單糖和某些二糖（如乳糖和麥芽糖）。在堿性溶液中，還原糖能將Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金屬離子還原，而糖本身被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。糖類的這種性質(zhì)常被用于糖的定性和定量測定。本實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法。費(fèi)林試劑由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和亞甲基藍(lán)（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。將

2、一定量的甲液和乙液等體積混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)，生成氫氧化銅沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4在堿性溶液中，所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反應(yīng)，生成可溶性的絡(luò)合物酒石酸鉀鈉銅：?反應(yīng)生成的氧化亞銅沉淀與費(fèi)林試劑中的亞鐵氰化鉀（黃血鹽）反應(yīng)生成可溶性復(fù)鹽，便于觀察滴定終點(diǎn)。Cu2O+K4Fe(CN)6+H2OCu2O+K4Fe(CN)6+H2OK2Cu2Fe(CN)6+2KOH滴定時以亞甲基藍(lán)為氧化－還原指示劑。因?yàn)閬喖谆{(lán)氧化能力比二價銅弱，待二價銅離子全部被還原后

3、，稍過量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無色的還原型的亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液量可計(jì)算出還原糖含量。試劑和器材：?一、試劑費(fèi)林試劑：甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g亞甲基藍(lán)，溶于蒸餾水中并稀釋到1000mL。乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75gNaOH，溶于蒸餾水中，再加入4g亞鐵氰化鉀［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸餾水稀釋到1000mL，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。0.1％葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1.000g經(jīng)98～100℃干燥至恒重的無水葡萄糖，加

4、蒸餾水溶解后移入1000mL容量瓶中，加入5mL濃HCl（防止微生物生長），用蒸餾水稀釋到1000mL。6mol/LHCl：取250mL濃HCl（35%～38%）用蒸餾水稀釋到500mL。碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100mL蒸餾水中。6mol/LNaOH：稱取120gNaOH溶于500mL蒸餾水中。0.1%酚酞指示劑。二、材料藕粉，淀粉。三、器材試管3.0×20cm（×1）；移液管5mL（×2）；燒杯100mL(×1);250mL錐形瓶;調(diào)溫電爐;滴定管25mL(×1)。操作方

5、法：一、樣品中還原糖的提取準(zhǔn)確稱取1g藕粉，放在100mL燒杯中，先以少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加入約40mL蒸餾水，混勻，于50℃恒溫水浴中保溫20min，不時攪拌，使還原糖浸出混。過濾，將濾液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。二、樣品中總糖的水解及提取準(zhǔn)確稱取1g淀粉，放在大試管中，加入6mol/LHCl10mL，蒸餾水15mL，在沸水浴中加熱0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。水解畢。冷卻至室溫

6、后加入1滴酚酞指示劑，以6mol/LNaOH溶液中和至溶液呈微紅色，并定容到100mL，過濾取濾液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混勻，即為稀釋1000倍的總糖水解液，用于總糖測定。三、空白滴定準(zhǔn)確吸取費(fèi)林試劑甲液和乙液各5.00mL，置于250mL錐形瓶中，加蒸餾水10mL。從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s，趁熱以每2s1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值，按

7、下式計(jì)算：式中：F──10mL費(fèi)林試劑（甲液和乙液各5.00mL）相當(dāng)于葡萄糖的量，mg；C──葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL；V──標(biāo)定時消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL。四、樣品糖的定量測定(1)樣品溶液預(yù)測定：吸取費(fèi)林試劑甲液及乙液各5.00mL，置于250mL錐形瓶中，加蒸餾水10mL，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時要保持溶液呈沸騰狀態(tài)。待溶液由藍(lán)色變淺時，以每2s1滴的速度滴定，直至溶液的藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄樣品溶液消

8、耗的體積。(2)樣品溶液測定：吸取費(fèi)林試劑甲液及乙液各5.00mL，置于錐形瓶中，加蒸餾水10mL，加玻璃珠3粒，從滴定管中加入比與測試樣品溶液消耗的總體積少1mL的樣品溶液，加熱使其在2min內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s，趁熱以每2s1滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗樣品溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值。五、結(jié)果處理其中：m──樣品重量，g；式中：F──10mL費(fèi)林試劑（甲液和乙液各5.00mL）相當(dāng)于葡萄糖的量，mg；V──標(biāo)定時平均消耗還原糖或總糖樣品溶液的總體積，m