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《臨床醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)全長(zhǎng)cdna質(zhì)粒文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、XX大學(xué)畢業(yè)論文細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定2014年6月25日細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定作者：呂剛，蘆亞君，范志剛，史大中，王虎，韓秀【摘要】目的：構(gòu)建細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)(E.g.)成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，并檢測(cè)文庫(kù)質(zhì)量。方法:提取E.g.成蟲(chóng)mRNA,應(yīng)用SMART方法構(gòu)建pBluescriptIISK全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，檢測(cè)文庫(kù)的重組率及容量；用載體克隆位點(diǎn)兩端的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)插入片段大小。隨機(jī)挑選陽(yáng)性重組克隆5端測(cè)序，歸并unigene，計(jì)算u
2、nigene得率，全長(zhǎng)性判定主要根據(jù)同源全長(zhǎng)基因5,末端進(jìn)彳亍比較判定并計(jì)算全長(zhǎng)率。結(jié)果:成功構(gòu)建Eg成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)。文庫(kù)的重組率為95.04%,庫(kù)容量1.13x106；平均插入片段長(zhǎng)度約為1.2kbo24個(gè)隨機(jī)陽(yáng)性克隆測(cè)序，unigene比例為69.57%,全＜性比率為64.71%。結(jié)論:成功構(gòu)建E.g.成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，文庫(kù)質(zhì)量良好?！娟P(guān)鍵詞】細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)；成蟲(chóng)；全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)；構(gòu)建；鑒定[ABSTRACT]Objective:Toconstructandevaluatef
3、ullLengthcDNAlibraryofadultEchinococcusgranulosus(E.g.).Methods:mRNAwasextractedfromtheadultE.g.andusedfortheconstructionoffulllengthcDNAlibraryusingSMARTpBluescriptIISKkit.Therecombinationrateandcapabilityofthelibrarywasmeasuredandthelengthofinsertfrac
4、tionofthepositiverecombinantcloneswastestedbyPCR.Positiverecombinantcloneswererandomlyselectedfor5'endsequencingandtheratesofunigene,ftilllengthcDNAwasanalyzedbyESTdatausingbioinformatics.Results:ThefulllengthcDNAlibrayofadultE.g.wasconstructedsuccessfu
5、lly.Therecombinationrateandcapabilityofthelibrarywere95.04%and1.13x106,respectively.Theaveragelengthofinsertfractionwasabout1.2kb.24recombinantclonesrandomlyselectedwerescqucnccd,therateofunigcncandfulllengthcDNAwere69.57%and64.71%.Conclusions:Ahighqual
6、ityoffulllengthcDNAplasmidlibraryofadultE.g.hasbeenconstructedsuccessfully.[KEYWORDS]Echinococcusgranulosus;Adult;FulllengthcDNAplasmidlibrary;Construction;Evaluation細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)(Echinococcusgranulosus,E.g.)成蟲(chóng)寄生丁?犬科動(dòng)物小腸，其中絳期幼蟲(chóng)細(xì)粒棘球蝴(包蟲(chóng)，echinococcuscyst/hydatid
7、cyst)寄生在中間宿主偶蹄類家畜(羊、牛、馬等)及人的多種器官、組織內(nèi)，引起以占位性病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)的囊型包蟲(chóng)病(cysticechinococcosis,CE),是種嚴(yán)重危害人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)的人畜共患寄生蟲(chóng)病。CE分布于世界許多國(guó)家的牧區(qū)，我國(guó)是CE的主要流行區(qū)之一，主要分布于西北牧區(qū)。CE是我國(guó)乃至世界一個(gè)重要的公共衛(wèi)生及經(jīng)濟(jì)問(wèn)題[1],已被列入我國(guó)十一五重大寄生蟲(chóng)病防治項(xiàng)目。疫苗及早期診斷是其防治的關(guān)鍵，廿前尚無(wú)成熟的疫苗及診斷試劑。該蟲(chóng)的基因組學(xué)及功能基因組學(xué)尚未開(kāi)展，已知基因甚少，不
8、利于對(duì)相關(guān)基礎(chǔ)問(wèn)題的研究，更不利于相關(guān)疫苗、診斷試劑及藥物的研究。木研究目的在于通過(guò)構(gòu)建E.g.成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)并對(duì)文庫(kù)質(zhì)量進(jìn)行鑒定，為人規(guī)模表達(dá)序列標(biāo)簽(expressedsequencetag,EST)測(cè)序，開(kāi)展基因表達(dá)譜分析，克隆和鑒定一批功能基因全長(zhǎng)cDNA序列，并為開(kāi)展重要基因的功能研究打下基礎(chǔ)。1材料與方法1.1材料與試劑E.g.成蟲(chóng)標(biāo)本采自青海省西寧市人工感染犬小腸，用滅菌生理鹽水漂洗3次后液氮凍存。試劑：Trizol總RNA提取試
