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《臨床醫(yī)學畢業(yè)論文細粒棘球絳蟲成蟲全長cdna質粒文庫的構建及鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、XX大學畢業(yè)論文細粒棘球絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建及鑒定2014年6月25日細粒棘球絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建及鑒定作者：呂剛，蘆亞君，范志剛，史大中，王虎，韓秀【摘要】目的：構建細粒棘球絳蟲(E.g.)成蟲全長cDNA質粒文庫，并檢測文庫質量。方法:提取E.g.成蟲mRNA,應用SMART方法構建pBluescriptIISK全長cDNA質粒文庫，檢測文庫的重組率及容量；用載體克隆位點兩端的引物進行PCR擴增，檢測插入片段大小。隨機挑選陽性重組克隆5端測序，歸并unigene，計算u
2、nigene得率，全長性判定主要根據同源全長基因5,末端進彳亍比較判定并計算全長率。結果:成功構建Eg成蟲全長cDNA質粒文庫。文庫的重組率為95.04%,庫容量1.13x106；平均插入片段長度約為1.2kbo24個隨機陽性克隆測序，unigene比例為69.57%,全＜性比率為64.71%。結論:成功構建E.g.成蟲全長cDNA質粒文庫，文庫質量良好?！娟P鍵詞】細粒棘球絳蟲；成蟲；全長cDNA質粒文庫；構建；鑒定[ABSTRACT]Objective:Toconstructandevaluatef
3、ullLengthcDNAlibraryofadultEchinococcusgranulosus(E.g.).Methods:mRNAwasextractedfromtheadultE.g.andusedfortheconstructionoffulllengthcDNAlibraryusingSMARTpBluescriptIISKkit.Therecombinationrateandcapabilityofthelibrarywasmeasuredandthelengthofinsertfrac
4、tionofthepositiverecombinantcloneswastestedbyPCR.Positiverecombinantcloneswererandomlyselectedfor5'endsequencingandtheratesofunigene,ftilllengthcDNAwasanalyzedbyESTdatausingbioinformatics.Results:ThefulllengthcDNAlibrayofadultE.g.wasconstructedsuccessfu
5、lly.Therecombinationrateandcapabilityofthelibrarywere95.04%and1.13x106,respectively.Theaveragelengthofinsertfractionwasabout1.2kb.24recombinantclonesrandomlyselectedwerescqucnccd,therateofunigcncandfulllengthcDNAwere69.57%and64.71%.Conclusions:Ahighqual
6、ityoffulllengthcDNAplasmidlibraryofadultE.g.hasbeenconstructedsuccessfully.[KEYWORDS]Echinococcusgranulosus;Adult;FulllengthcDNAplasmidlibrary;Construction;Evaluation細粒棘球絳蟲(Echinococcusgranulosus,E.g.)成蟲寄生丁?犬科動物小腸，其中絳期幼蟲細粒棘球蝴(包蟲，echinococcuscyst/hydatid
7、cyst)寄生在中間宿主偶蹄類家畜(羊、牛、馬等)及人的多種器官、組織內，引起以占位性病變?yōu)橹饕R床表現的囊型包蟲病(cysticechinococcosis,CE),是種嚴重危害人類健康和畜牧業(yè)生產的人畜共患寄生蟲病。CE分布于世界許多國家的牧區(qū)，我國是CE的主要流行區(qū)之一，主要分布于西北牧區(qū)。CE是我國乃至世界一個重要的公共衛(wèi)生及經濟問題[1],已被列入我國十一五重大寄生蟲病防治項目。疫苗及早期診斷是其防治的關鍵，廿前尚無成熟的疫苗及診斷試劑。該蟲的基因組學及功能基因組學尚未開展，已知基因甚少，不
8、利于對相關基礎問題的研究，更不利于相關疫苗、診斷試劑及藥物的研究。木研究目的在于通過構建E.g.成蟲全長cDNA質粒文庫并對文庫質量進行鑒定，為人規(guī)模表達序列標簽(expressedsequencetag,EST)測序，開展基因表達譜分析，克隆和鑒定一批功能基因全長cDNA序列，并為開展重要基因的功能研究打下基礎。1材料與方法1.1材料與試劑E.g.成蟲標本采自青海省西寧市人工感染犬小腸，用滅菌生理鹽水漂洗3次后液氮凍存。試劑：Trizol總RNA提取試
