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《里氏木霉纖維二糖水解酶基因cbh1的分子改造.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、南方農(nóng)業(yè)學報JournalofSouthemAgriculture2014．45(10)：1739—1743ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．caDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．10．1739里氏木霉纖維二糖水解酶基因cbhl的分子改造陳小玲1，張穗生1，黃俊1，雷富2，陳東卜(1廣西科學院非糧生物質(zhì)酶解國家重點實驗室／國家非糧生物質(zhì)能源工程技術研究中心／廣西生物質(zhì)煉制重點實驗室，南寧530007；2廣西科學院廣西近海海洋環(huán)境科學重點實驗室，南寧530007)摘要：【目的】用分子改造的方法改造里氏木霉(Tf
2、ichodermareesei)的纖維二糖水解酶基因cbhl，提高其纖維素酶活力，為工業(yè)化生產(chǎn)纖維素酶提供參考?！痉椒ā坑肈NaseI消化里氏木霉cbhl，回收100bp左右的片段后用T4DNA連接酶連接，以連接產(chǎn)物作為模板進行PCR擴增，將PCR改造的cbhl基因轉(zhuǎn)化里氏木霉原生質(zhì)體，使改造的cbhl基因與里氏木霉原有的cbhl基因發(fā)生同源重組。通過比較濾紙酶活力的方法篩選纖維素酶活力提高的突變菌株，在NCBI上比對分析突變菌株的cbhl序列?！窘Y果】經(jīng)克隆測序獲得基因片段大小為637bp，與里氏木霉同屬菌株cbhl基因的相似性在880／一98％，確定為里氏木霉cbhl的基因片段。經(jīng)DNas
3、eI消化15min、T4DNA連接酶連接、經(jīng)PCR擴增獲得改造后的cbhI基因。將改造cbhl基因片段轉(zhuǎn)化里氏木霉原生質(zhì)體，得到cbhl基因突變體庫。從cbhl基因突變體庫中篩選獲得1株纖維素酶濾紙酶活比出發(fā)菌株高1．7518倍的突變菌株E2．。。序列比對分析發(fā)現(xiàn)，與出發(fā)菌株相比，突變菌株巨。的cbhl基因有14個堿基發(fā)生了突變，其中5個堿基為置換突變，8個堿基為缺失突變，1個堿基為插入突變，分布于cbhl基因的9個位置?！窘Y論】改造后的cbh硅因能與里氏木霉的染色體DNA發(fā)生同源重組，進而提高突變菌株的纖維素濾紙酶活力。關鍵詞：里氏木霉；纖維素酶；纖維二糖水解酶基因；分子改造；堿基突變中圖分
4、類號：Q785文獻標志碼：A文章編號：2095—1191(2014)10—1739—05MolecularmodificationofceUobiohydrolasegenecbhlfromTrichodermareeseiCHENXiao—ling1，ZHANGSui—sheng1，HUANGJunl，LEIFu2，CHENDong1+(1StateKeyLaboratoryofNon-FoodBiomassandEnzymeTechnology，GuangxiAcademyofScience／NationalEngineeringResearchCenterforNon-FoodBiore
5、finery／GuangxiKeyLaboratoryofBiorefinery，Nanning530007，China；2GuangxiKeyLaboratoryofMarineEnvironmentalScience，GuangxiAcademyofSciences，Nanning530007，China)Abstract：【Objective】MolecularmodificationofcellobiohydmlasegenecbhlfromrreeseiWaScarriedouttoim—provecellulaseactivityinordertoprovidescientific
6、refereneeforeommercialproductionofeellulase．【Method】Cel—lobiohydrolasegenecbhIfromrreeseiwasdigestedwithDNaseI．a(chǎn)ndtherecycledfragmentsabout100bpwerelinkedwithT4DNAligaserandomly．Byusingtheconnectionproductastemplates，thecbhlsequencewasamplifiedbyPCRmethod．ThemodifiedebbJgenewastransferredintorreesei
7、protoplasttoconducthomologousrecombina—tionwithoriginalcbhJ．MutantstrainswithhighcellulaseactivitywerescreenedbasedonfilterPaDerenzymeactivity．cbhlgenesequencealignmentwasperformedintheNCBI．【Result】r1
