水稻T-DNA插入突變體庫(kù)的構(gòu)建及側(cè)翼序列的分離.pdf

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1、ConstructionofMutantPopulationforIndicaRiceKasalathandAnalysisoftheFlankingSequencebySHANGShangAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencemBiochemistryandMolecularBiologymCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad,TianxinDist

2、rictChangshaHunan410004,P.R.CHINASupervisorProfessorWANGPing,ResearchFollowCHENCaiyanApril,2011J

3、IIIIliltIIIIi中南林業(yè)科技大學(xué)..j,Y1913學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的成果作品,也不包含為獲得中南林業(yè)科技大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)所使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均己在文中以明確方式表明。本

4、人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。雙劣作者簽名:N便伽11年6月.7日中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件或電子版,允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)中南林業(yè)科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于:摘要水稻是世界上重要的糧食作物之一,由于其基因組較小,遺傳背景清晰,成熟的遺傳轉(zhuǎn)化體系,與其它禾本科植物存在廣泛的共線性等特點(diǎn),成為單子葉植物研究的模式植物。研究水稻目的基

5、因組功能可以通過(guò)創(chuàng)造基因功能缺失突變體這個(gè)最為有效的途徑進(jìn)行。構(gòu)建大量的水稻突變體庫(kù)在研究水稻功能基因組中占有非常重要的作用。本研究是以水稻秈稻品種Kasalath為受體材料,通過(guò)構(gòu)建pCAMBLA1301.pUCl9載體,利用農(nóng)桿菌侵染的方法轉(zhuǎn)化至水稻中,獲得如下結(jié)果:1.利用限制性內(nèi)切酶HindⅢ、XbaI對(duì)pCAMBIA1301和pUCl9進(jìn)行雙酶切,然后利用T4連接酶進(jìn)行連接,成功構(gòu)建pCAMBIA1301.pUCl9載體。2.以水稻秈稻品種Kasalath成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織為轉(zhuǎn)化受體,利用農(nóng)桿菌侵染法將pCAMBIA1301-pUCl9導(dǎo)入Kasalath中

6、,獲得再生植株280棵。3.通過(guò)對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的T-DNA插入遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化,將對(duì)水稻秈稻品種Kasalath得到轉(zhuǎn)基因苗的時(shí)間由3個(gè)月縮短至36天。通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析Kasalath轉(zhuǎn)化的分化率可達(dá)到3.5%。4.對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果表明pCAMBIA1301.pUCl9已經(jīng)整合到水稻基因組中。5.利用質(zhì)粒營(yíng)救對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的T-DNA插入的側(cè)翼序列進(jìn)行測(cè)序,通過(guò)與GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),得到T-DNA插入位置。關(guān)鍵詞:水稻Kasalath:水稻突變體庫(kù);側(cè)翼序列;插入突變ABSTRACTRiceisoneofthemostimportantfoodcr

7、opsintheworld,becauseofrelativesmallgenomesize,sophisticatedgenetictransformationsystem,well-constructedphysicalmap,andnearcompletionofthegenomicsequencingprojectofsubspecies,andthereisawiderangeofothergrassesandothercharacteristicswerelinearandbecamethemodelmonocotplantresearch.Function

8、officegenomegenefunctionbycreatingmutantthemosteffectiveways.Constructionofalargenumberofricemutantlibraryofricefunctionalgenomicsinthestudyplaysaveryimportantrole.Inthisstudy,Kasalathriceforthereceptormaterial,BybuildingpCAMBIA1301-pUCI9vector,transformedbyAgrobacteriumi

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